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在3D细胞培养中监测生物学的测定和工具

研究人员正在转向3D培养方法来创建研究细胞生物学的模型系统。3D细胞培养比2D环境更能模拟组织或肿瘤环境,促进与基质的更自然的相互作用,甚至允许细胞分泌自己的基质。3D细胞培养还提供了更自然的细胞间接触,并产生了O2和养分。

通常,与单层培养相比,3D细胞培养可以揭示细胞反应的巨大差异。通过观察细胞健康、代谢和表达的变化,可以在3D培养中监测细胞的生物学。最终,这些表型变化与细胞的基因型或导致疾病状态的基因型改变有关。从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析,我们提供分析方法和工具来解决您工作流程中的每一步。

3D细胞培养新手?

了解3D细胞培养,为什么和如何使用它们,以及如何为3D模型选择分析。

3D细胞培养指南
3D分析如何在实验室工作?

了解一个实验室如何在卵巢癌研究的3D模型中使用细胞健康分析。

阅读案例研究

细胞健康变化

大多数细胞健康检测是用于监测单层培养的细胞。在三维培养的细胞中使用这些分析,无论是球形培养还是在水凝胶基质上,都带来了挑战。如果你需要从细胞质中分离出蛋白质或代谢物,标准方案不太可能适用于3D培养。方案和试剂必须针对3D培养进行优化。CellTiter- Glo®3D检测优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们开发了用于3D培养的优化方案,用于我们通常用于单层培养的其他几种分析。

特色产品

CellTiter-Glo®3D细胞活力分析

溶解性试验

使用专为3D培养设计的试剂,通过测量ATP来监测细胞活力。采用与经典CellTiter-Glo化验相同的ATP测量荧光素酶化学,具有更大的裂解能力,允许更深的渗透产生更大的ATP释放用于定量。用CellTox™Green细胞毒性试验或用LDH-Glo™细胞毒性试验进行培养基采样,用同孔复用共同测量死亡细胞。

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与ATPlite 1Step试剂相比,CellTiter-Glo®3D的裂解能力
与ATPlite 1Step试剂相比,CellTiter-Glo®3D的裂解能力

细胞生存能力

RealTime-Glo™MT细胞活力测定

Non-Lytic化验

通过生物发光实验连续监测细胞活力长达72小时。极其灵敏的测定法监测细胞还原当量。从同一孔中分离核leyu体育靠谱吗酸,用于基因表达或基因组分析。Multiplex与CellTox™Green还可测量死亡细胞。

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RealTime-Glo™MT细胞活力测定对增加HCT116球体直径的响应
RealTime-Glo&trade的回应;增加HC116球体直径的MT细胞活力测定

详情见申请须知(链接如下)。

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细胞毒性

LDH-Glo™细胞毒性试验

Non-Lytic化验

通过乳酸脱氢酶释放测量细胞毒性与此敏感的生物发光试验。该方法每个时间点只需要2-5μl培养基,允许从同一孔中多次取样。用于测量细胞毒性之前的其他细胞分析,如CellTiter- Glo®3D或Caspase-Glo®3/7化验。

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LDH-Glo™检测方法和CellTiter-Glo®检测方法的复用
LDH-Glo™检测方法和CellTiter-Glo®检测方法的复用

黄曲霉毒素B1处理人肝微组织球形48小时。收集培养基样品,用LDH-Glo™法测定。其余细胞用CellTiter-Glo®3D法测定活力。详情请参阅技术手册TM548

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细胞毒性

CellTox™绿色细胞毒性检测

Non-Lytic化验

通过荧光试验连续72小时监测细胞毒性。细胞不渗透的DNA结合染料进入细胞膜受损的细胞并染色细胞DNA。Multiplex与RealTime- Glo™MT连续监测活细胞和死亡细胞或使用CellTiter-Glo®3D终点分析。

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多路复用监测活细胞和死细胞
多路复用监测活细胞和死细胞

详情见科学海报(链接如下)。

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细胞凋亡

Caspase-Glo®3/7 3D分析

溶解性试验

使用灵敏的生物荧光检测caspase-3和-7活性来监测细胞凋亡。多重与细胞毒性和细胞活力分析,以更完整地描述凋亡反应。

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CellTox™绿色细胞毒性检测,CellTiter-Fluor™细胞活力检测和Caspase-Glo®3/7 3D检测
CellTox™Green细胞毒性检测和Caspase-Glo®3/7检测的复合

硼替佐米作用24小时后A549球体的同孔多路复用。荧光和发光使用GloMax®Discover仪器进行测量。

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细胞凋亡

RealTime-Glo™Annexin V细胞凋亡和坏死检测

Non-Lytic化验

通过多重生物发光膜联蛋白V试验和荧光坏死试验连续监测细胞凋亡和继发性坏死长达48小时。从同一孔中分离核leyu体育靠谱吗酸,用于基因表达或基因组分析。

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HepG2球体膜联蛋白V暴露和继发性坏死的测定
HepG2球体膜联蛋白V暴露和继发性坏死的测定

使用RealTime-Glo™annexin V凋亡和坏死测定法测量HepG2球体暴露于紫杉醇48小时后annexin V暴露和继发性坏死。使用GloMax®Discover仪器测量发光和荧光。

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ADME

P450‐Glo™CYP3A4检测和筛选系统

非溶解分析选项

监测细胞色素P450酶的活化情况(CYP1A2CYP2B6而且CYP2C9也可用)通过生物发光试验。非溶菌方案选项使用相同的方案用于单层和3D培养,其中前底物扩散到细胞中,通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞,在培养基上进行测定。细胞可用于其他以细胞为基础的分析或核酸提取。leyu体育靠谱吗

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监测人肝组织CYP3A4活性和活力
监测人肝组织细胞色素P450 3A4活性和活力

监测人肝显微组织细胞色素P450 3A4活性和活性对利福平的反应。CYP3A4活性用非溶性P450-Glo™3A4法测定,使用荧光素- ipa,然后用CellTiter- Glo®3D法测定同孔活力。使用GloMax®Discover仪器测量。

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自噬

自噬LC3 HiBiT报告系统

Non-Lytic化验

用生物荧光板法监测LC3-II自噬通量。用LC3 HiBiT报告细胞稳定转染细胞,在3D培养中生长,并使用Lytic HiBiT检测系统进行监测。报告还允许通过荧光显微镜监测LC3-II蛋白。

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表达LC3 HiBiT报告基因的HEK293球体对自噬刺激物和抑制剂的反应
表达LC3 HiBiT报告基因的HEK293球体对自噬刺激物和抑制剂的反应

详情见科学海报(链接如下)。

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免疫原性细胞死亡

RealTime-Glo™细胞外ATP检测

Non-Lytic化验

RealTime-Glo™细胞外ATP测定法是一种生物荧光测定法,用于动态监测死亡、应激或活化细胞中ATP的释放。细胞外ATP可以作为一种损伤相关分子模式(DAMP)发挥作用,是确定治疗是否诱导免疫原性细胞死亡的关键生物标志物,免疫原性细胞死亡是一种导致免疫反应的特殊形式的细胞死亡。

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Staurosporine处理HCT-116球体ATP释放
兼容3D单元模型

使用RealTime-Glo™细胞外ATP测定法监测ATP释放,并在24小时内每10分钟测量一次。

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代谢变化

能量代谢对细胞健康和功能至关重要,代谢物与细胞能量、细胞构建模块的创建和信号通路有关。我们为3D细胞培养应用提供了几种测量代谢活性的优化方案,包括乳酸盐、谷氨酰胺、氧化应激和二核苷酸检测测定。普通样品制备允许与葡萄糖- glo™,乳酸- glo™,谷氨酸- glo™和谷氨酰胺/谷氨酸- glo™测定从同一样品共同测量。

特色产品

Glucose-Glo™试验

非溶解分析选项

葡萄糖的灵敏生物发光测量。每个时间点只需要2-5μl的条件细胞培养基,每孔允许多个样品进行时间过程研究。在微球条件培养基上进行试验。

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胰岛素介导的iCell®球形肝细胞糖异生抑制
胰岛素介导抑制iCell肝细胞球形糖异生的数据图13890mb-w

代谢物检测

Lactate-Glo™试验

非溶解分析选项

使用非溶性,敏感的生物荧光检测选项监测3D培养乳酸的变化。每个时间点只需要2-5μl培养基,可以从同一孔中提取多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。leyu体育靠谱吗

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代谢物检测

Glutamate-Glo™试验

非溶解分析选项

使用非溶性、敏感的生物荧光检测选项监测3D培养物中的谷氨酸变化。每个时间点需要2-5μl培养基,允许从同一孔中提取多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。leyu体育靠谱吗

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代谢物检测

谷氨酰胺/ Glutamate-Glo™试验

非溶解分析选项

使用非溶性,敏感的生物荧光检测选项监测三维培养中的谷氨酰胺和谷氨酸的变化。基于谷氨酰胺转化为谷氨酸的谷氨酰胺测量。每个时间点只需要2-5μl培养基,可以从同一孔中提取多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸提取。leyu体育靠谱吗

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脂质代谢

Glycerol-Glo™试验

非溶解分析选项

甘油- glo测定法是一种生物发光测定法,用于快速、灵敏地测量各种生物样品(包括3D培养的细胞)中的甘油。甘油通常是脂解的产物,从甘油三酯中释放出来。任何导致细胞外和细胞内甘油浓度变化的过程都可以用甘油- glo™测定法进行研究。

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脂质代谢

Triglyceride-Glo™试验

溶解性试验

甘油三酯- glo测定法是一种生物发光测定法,用于快速、灵敏地测定培养细胞裂解物中的甘油三酯。该方法是测量正常和病理条件下甘油三酯积累和清除的理想方法。

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人体肝脏微组织中的甘油三酯水平
16243 ma-w

有关详细信息,请参阅下面链接的技术文章。

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脂质代谢

胆固醇/胆固醇酯- glo™检测

溶解性试验

胆固醇/胆固醇酯- glo检测方法是一种快速、灵敏的生物荧光检测方法,用于测量培养细胞裂解物和其他生物样品(如细胞培养基)中的胆固醇和胆固醇酯。胆固醇是一种重要的脂质,参与类固醇生成、胆汁酸合成、细胞信号传递和膜结构的维持。

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氧化应激

谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验

溶解性试验

用灵敏的生物发光测定法监测谷胱甘肽/谷胱甘肽比值的变化。平行井处理总谷胱甘肽+ GSSG和仅处理GSSG,结果得到谷胱甘肽/ GSSG比值。从单层培养(5分钟震动)到3D培养(30分钟震动)的微小变化。CellTox™Green可用于上游监测细胞毒性。

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HCT 116球体平行井中总谷胱甘肽和活力的监测
HCT 116球体平行井中总谷胱甘肽和活力的监测

在用GSH/GSSG-Glo™测定方法或CellTiter-Glo®3D测定方法测定总谷胱甘肽之前,用丁硫氨酸亚砜胺处理球体48小时。详情见科学海报(链接如下)。

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氧化应激

ROS-Glo™H2O2分析

非溶解分析选项

通过生物发光H监测活性氧物种2O2化验。原荧光素底物直接与H2O2检测组件将激活的前底物转化为荧光素,用于生物发光检测。同样的方法用于单层和3D培养。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸提取。leyu体育靠谱吗

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HepG2球状体对诱导ros的Menadione的反应
HepG2球状体对美那醌的反应

不同直径的HepG2球体对不同水平的甲萘醌的反应。细胞在超低附着板中培养4天(康宁)。H2O2用ROS-Glo™H测量2O2在GloMax®Discover仪器上进行分析和读取。详情见申请须知(链接如下)。

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核苷酸和辅助因子检测

NAD/NADH-Glo™和NADP/ NADPH-Glo™检测

溶解性试验

用这种裂解生物发光法监测NAD+/NADH或NADP/NADPH的比值。裂解液被分割,并通过酸碱反应测量氧化或还原形式的NAD+或NADH。对标准单层协议的轻微修改(详情见下面的海报链接)。

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表达的变化

与单层培养相比,3D培养的细胞在基因表达上存在差异。细胞与细胞之间的接触和细胞与基质之间的接触会有很大的不同,培养物中氧气和营养物质的梯度也会影响基因表达。为了分析基因表达的差异,必须分离和定量RNA。然后,通过RT-qPCR分析特定基因或通过RNA-seq等技术监测细胞变化。

特色产品

ReliaPrep™RNA Miniprep系统

从3D培养中分离应用就绪的总RNA或miRNA,以监测表达的变化。ReliaPrep™RNA Miniprep系统与RealTime-Glo™MT细胞活力分析等非溶性细胞分析协同作用。

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HEK293微组织球状体RNA的提取
HEK293微组织球状体RNA的提取

基因组分析

了解基因型-表型或表型-基因型差异是重要的,特别是在研究原代细胞或肿瘤时。你可以分析基因型并使用3D细胞培养来了解表型,或者你可以选择研究表型,然后观察基因型来了解为什么会发生这些变化。对于基因组DNA分析,您将需要提取和量化DNA。然后您将通过qPCR或选择用NGS检查基因组来查看特定的基因。如果您正在处理原代细胞,则必须能够区分哪个样本来自哪个供体- str配置文件通常用于该任务。STR配置文件对于确认正在使用的单元格确实是您想要的单元格也很重要。

特色产品

Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒

使用Maxwell®RSC仪器,通过简单的自动协议从3D培养物中分离出应用就绪的基因组DNA进行基因组分析。纯化的DNA在45分钟内就可以进行分析。分离出的gDNA可用于基于qpcr的基因拷贝数和生物标志物分析,基于str的样本跟踪或验证分析,以及基于测序的分析。

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用Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
用Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
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