在3D细胞培养中监测生物学的测定和工具
研究人员正在转向3D培养方法，如球体和类器官来创建研究细胞生物学的模型系统。3D细胞培养通过促进与基质的更自然的相互作用，甚至允许细胞分泌自己的基质，比2D环境更接近地模拟组织或肿瘤环境。3D细胞培养还提供了更自然的细胞间接触，并产生了通往O的梯度2和养分。
通常，与单层培养相比，3D细胞培养可以揭示细胞反应的巨大差异。通过观察细胞健康、代谢和表达的变化，可以监测3D培养细胞的生物学特性。最终，这些表型变化与细胞的基因型或导致疾病状态的基因型改变有关。我们提供检测和工具来解决您工作流程中的每一步，从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析。
细胞运行状况变化
大多数细胞健康测定法是为监测单层培养的细胞而设计的。在3D培养的细胞中使用这些检测，无论是球形培养，类器官还是水凝胶基质，都具有挑战性。如果需要从细胞质中分离蛋白质或代谢物，则标准方案不太可能用于3D培养。方案和试剂必须针对3D培养进行优化。CellTiter- Glo®3D分析优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们已经开发了用于3D培养的优化方案，用于我们通常用于单层培养的其他几种检测。
细胞生存能力
RealTime-Glo™MT细胞活力测定
Non-Lytic化验
通过生物发光试验连续监测细胞活力长达72小时。极其敏感的检测监测细胞还原当量。从同一井中分离核leyu体育靠谱吗酸用于基因表达或基因组分析。多重与CellTox™绿色也测量死细胞。
real - time - glo™MT细胞活力测定对增加HCT116球体直径的响应
详情请参阅申请须知(以下连结)。
细胞毒性
LDH-Glo™细胞毒性试验
Non-Lytic化验
通过乳酸脱氢酶释放测定细胞毒性。该试验每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一孔中多次取样。用于在CellTiter- Glo®3D或Caspase-Glo®3/7 Assay等其他细胞测定之前测量细胞毒性。
混合LDH-Glo™检测和CellTiter-Glo®检测
用黄曲霉毒素B1处理人肝微组织球体48小时。培养基样品收集并使用LDH-Glo™Assay进行检测。用CellTiter-Glo®3D Assay检测剩余细胞的活力。详情载于技术手册TM548．
细胞毒性
CellTox™绿色细胞毒性试验
Non-Lytic化验
通过荧光检测连续监测细胞毒性72小时。细胞不可渗透的DNA结合染料进入细胞膜受损的细胞并染色细胞DNA。Multiplex与RealTime- Glo™MT连续监测活细胞和死细胞或使用上游CellTiter-Glo®3D终点分析。
同一井多路复用监测活细胞和死细胞
详情见科学海报(链接如下)。
细胞凋亡
Caspase-Glo®3/7 3D分析
溶解性试验
使用敏感的生物发光法监测凋亡，测量caspase-3和-7活性。多重细胞毒性和细胞活力测定，更完整地表征凋亡反应。
复合CellTox™绿色细胞毒性检测，CellTiter-Fluor™细胞活力检测和Caspase-Glo®3/7 3D检测
接触硼替佐米24小时后A549球体上的同孔多路复用。荧光和发光测量使用GloMax®Discover仪器。
细胞凋亡
RealTime-Glo™Annexin V细胞凋亡和坏死试验
Non-Lytic化验
通过多重生物发光膜联蛋白V试验和荧光坏死试验连续监测细胞凋亡和继发性坏死长达48小时。从同一井中分离核leyu体育靠谱吗酸用于基因表达或基因组分析。
膜联蛋白V暴露和HepG2球体继发性坏死的测定
使用RealTime-Glo™膜联蛋白V凋亡和坏死测定法测量紫杉醇暴露48小时后HepG2球体的膜联蛋白V暴露和继发坏死。使用GloMax®Discover仪器测量发光和荧光。
ADME
P450‐Glo™CYP3A4检测和筛选系统
非溶性分析选项
监测细胞色素P450酶的活化(CYP1A2，CYP2B6和CYP2C9也可用)通过生物发光试验。非裂解方案选择使用相同的方案单层和3D培养，其中前底物扩散到细胞中，通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞，在培养基上进行测定。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸提取。leyu体育靠谱吗
监测人肝脏微组织CYP3A4活性和活力
监测人肝微组织细胞色素P450 3A4对利福平反应的活性和活力。采用荧光素- ipa非溶性P450-Glo™3A4法测定CYP3A4活性，随后采用CellTiter- Glo®3D法测定同孔活力。使用GloMax®Discover仪器测量。
代谢物检测
Lactate-Glo™试验
非溶性分析选项
监测乳酸变化的3D培养使用非裂解，敏感的生物发光测定选项。每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一井中获得多个样品。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸分离。leyu体育靠谱吗
代谢物检测
Glutamate-Glo™试验
非溶性分析选项
监测谷氨酸变化在3D培养使用非裂解，敏感的生物发光测定选项。每个时间点需要2-5μl培养基，允许从同一孔中获得多个样品。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸分离。leyu体育靠谱吗
代谢物检测
谷氨酰胺/ Glutamate-Glo™试验
非溶性分析选项
监测谷氨酰胺和谷氨酸变化在3D培养使用非裂解，敏感的生物发光测定选项。谷氨酰胺转化为谷氨酸的谷氨酰胺测定。每个时间点只需要2-5μl培养基，允许从同一井中获得多个样品。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸提取。leyu体育靠谱吗
脂质代谢
Glycerol-Glo™试验
非溶性分析选项
甘油- glo™检测是一种生物发光检测，用于快速、灵敏地测量各种生物样品中的甘油，包括3D培养的细胞。甘油通常被测量为脂解的产物，它从甘油三酯中释放出来。任何导致细胞外和细胞内甘油浓度变化的过程都可以使用glycerol - glo™Assay进行研究。
脂质代谢
Triglyceride-Glo™试验
溶解性试验
甘油三酯- glo™测定法是一种生物发光测定法，用于快速、灵敏地测定培养细胞裂解物中的甘油三酯。该分析是理想的测量甘油三酯积累和清除在正常和病理条件下。
人体肝脏微组织中甘油三酯水平
有关详细信息，请参阅下面链接的技术文章。
脂质代谢
胆固醇/胆固醇酯- glo™测定
溶解性试验
胆固醇/胆固醇酯- glo™测定是一种快速、灵敏的生物发光测定方法，用于测定培养细胞裂解物和其他生物样品(如细胞培养基)中的胆固醇和胆固醇酯。胆固醇是一种必需的脂质，参与类固醇生成、胆汁酸合成、细胞信号传导和膜结构的维持。
氧化应激
谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验
溶解性试验
用灵敏的生物发光法监测GSH/GSSG比值的变化。平行井处理总GSH + GSSG和仅GSSG，结果得到GSH/ GSSG比率。小方案从单层(摇5分钟)改为3D培养(摇30分钟)。CellTox™Green可用于上游监测细胞毒性。
HCT 116球虫平行井中总谷胱甘肽及活力的监测
球体在用GSH/GSSG-Glo™Assay或celltir - glo®3D Assay测定总谷胱甘肽之前，用丁硫氨酸亚砜胺处理48小时。详情见科学海报(链接如下)。
表达的变化
与单层培养相比，在3D培养中生长的细胞在基因表达方面可能存在差异。细胞与细胞接触和细胞与基质接触的变化将是非常不同的，培养物中氧气和营养物质的梯度也会影响基因表达。为了分析基因表达的差异，必须分离和定量RNA。然后，通过RT-qPCR分析特定基因，或者通过RNA-seq等技术监测细胞变化。
基因组分析
了解基因型-表现型或表现型-基因型的差异是很重要的，特别是在研究原代细胞或肿瘤时。你可以分析基因型，并使用3D细胞培养来了解表型，或者你可以选择研究表型，然后观察基因型，以了解为什么会发生这些变化。对于基因组DNA分析，您需要提取并定量DNA。然后，你将通过qPCR来观察特定的基因，或者选择用NGS来检查基因组。如果您正在处理原代细胞，您必须能够区分哪个样本来自哪个供体-通常为该任务选择str谱。STR配置文件对于确认您正在使用的细胞确实是您想要的细胞也很重要。
