淋巴细胞免疫疗法
fda批准的工程T细胞疗法包括用抗原特异性T细胞受体(TCRs)或嵌合抗原受体(CARs)对患者自身免疫细胞进行基因修饰(自体疗法)。当这些精密工程细胞被重新引入患者体内时，它们会指示患者的免疫系统识别并杀死肿瘤细胞。该领域未来的进展将包括更复杂的功能T细胞工程、新型细胞疗法(NK和巨噬细胞疗法)和现成的细胞疗法产品(异体疗法)的可用性。leyu乐鱼网
功能复杂的T细胞疗法的开发和制造需要同样复杂的生化和基于细胞的分析。利用我们广泛的生物发光检测技术组合，我们开发了一套检测方法，以实现:
- 发现新的抗原特异性TCRs和CARs
- T细胞活化和细胞因子产生的测定
- 靶细胞杀伤(TCK)药效测定方法的发展
TCR的发现和表征
通过嵌合抗原受体(CAR)或转基因T细胞受体(TCR)基因修饰T细胞重定向是T细胞重定向治疗的重要策略之一，代表了癌症治疗的一种新范式。为了便于新的转基因TCRs的筛选和表征，我们开发了两种tcrα β-缺失报告T细胞系，分别为CD4+和CD8+。将肽特异性TCRα和β链重新引入TCRαβ-缺失报告T细胞株，可导致肽依赖性TCR激活。在tcr αβ-缺失报告T细胞系中选择CD4或CD8的表达可以使MHCI和MHCI限制性肿瘤抗原靶点的转基因TCRs的发展成为可能。总之，这些生物荧光生物检测代表了一套新的工具，用于发现和发展基于T细胞的免疫疗法。
我们已经开发了一套T细胞活化生物测定通过NFAT或IL-2驱动的荧光素酶报告基因的表达来测量TCR信号。为了更好地帮助研究人员开发工程T细胞疗法，我们还创建了一种缺乏内源性TCRαβ链表达的T细胞激活生物测定法。的T细胞活化生物测定(TCRαβ-KO)消除了内源性α和β链与转基因TCRs的交叉配对，并提供了改进的检测窗口。
- 测量转基因TCRs和CARs的活性和效力
- 生物测定细胞缺乏内源性TCRαβ表达
- 可提供CD4+， CD8+， CD4+CD8+， CD4-CD8-格式
用T细胞活化生物测定法(TCRαβ-KO, CD4+)测定转基因TCRs的活性。面板。TCRαβ- ko (CD4+)细胞转染阳性对照TCR质粒(或模拟转染)，然后与MHCII APC细胞(HLA-DR+细胞)共培养，并增加阳性对照肽的浓度。面板B。采用T细胞活化生物测定法(内源性TCR, CD4+)和T细胞活化生物测定法(TCRαβ- ko, CD4+)测定TCR介导的T细胞活化。T细胞活化生物测定细胞与hla - dr阳性细胞和不断增加的同源肽共培养。经过修饰的T细胞一旦与肿瘤细胞上的抗原结合，就会被激活，如发光所示。数据表明，T细胞活化生物测定法可用于筛选用于T细胞免疫治疗的转基因TCRs。
T细胞活化和细胞因子的产生
细胞因子的产生，特别是IFN-γ和IL-2，是激活的细胞毒性T细胞的一个特征。我们已经开发了T细胞细胞因子免疫分析法使用的新Lumit™免疫分析平台．这些检测提供了敏感的生物发光检测关键细胞因子的释放，如IL-2和IFN-γ。
Lumit™免疫测定法测定活化CD8 T细胞产生的IL-2和IFN-γ。纯化的CD8+ T细胞(效应细胞)与Raji B细胞(靶细胞)和Blincyto®系列稀释剂(CD3xCD19双特异性T细胞参与剂)结合。干扰素-γ(板一个)和IL-2 (面板B)的水平用相应的Lumit™细胞因子免疫测定法测定，以检测效应细胞释放的细胞因子。
靶细胞杀伤(TCK)
效应细胞靶向杀伤肿瘤或感染细胞是许多免疫治疗药物的主要作用机制。因此，有必要在药物开发过程中证明对靶细胞的强大和特异性杀伤。传统的细胞毒性测定方法不能区分靶细胞和效应细胞。此外，靶细胞特异性分析通常是费力的，需要放射性或荧光标记。
HiBiT靶细胞杀伤生物检测平台简单、均匀、高灵敏度并提供了一个健壮的检测窗口。它能够对多种生物药物(包括单克隆抗体、双特异性抗体和CAR-T细胞)诱导的靶细胞杀伤进行高度敏感和特异性的测量。这些分析提供了表达HiBiT融合蛋白的常用靶细胞的选择。靶细胞被杀死后，会产生一个明亮的发光信号。
延长的检测孵育时间显示一系列TCK活性。CAR-19或GFP对照慢病毒转导的T细胞与HiBiT靶细胞(Ramos)以不同的效应比(E:T)结合。孵育24小时后(板一个)或48小时(面板B)，加入NanoBiT®细胞外检测试剂，并在GloMax®Discover平板阅读器上读取发光。欧共体50这表明在较低的E:T比率下连续TCK活动。