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细胞能量代谢测定

能量代谢是生物学的一个基本原理:每个细胞都有一个代谢图谱。研究代谢变化可以帮助确定细胞分化的状态,描述免疫反应或癌细胞的概况,并确定如何最好地治疗疾病。

Promega生物发光代谢物分析是一种获得细胞代谢全面视图的简单方法。请继续阅读,了解如何使用这些简单、敏感和可扩展的添加-读取分析方法来测量葡萄糖、氨基酸和脂质代谢相关的代谢途径。

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细胞代谢途径

细胞能量代谢是多种代谢途径动态相互作用的结果。Promega提供了敏感的,易于使用的检测试剂盒来监测这些途径和相关因素。

通路 葡萄糖代谢 氨基酸代谢 脂质代谢 线粒体功能与氧化应激 代数余子式
可用的化验 葡萄糖摄取(2DG6P) 谷氨酰胺 甘油三酸酯 三磷酸腺苷 NAD / NADH
葡萄糖 谷氨酸 甘油 ROS 辅酶ii / NADPH
乳酸 支链氨基酸(BCAA) 胆固醇 谷胱甘肽 NAD (P) H
糖原 胆固醇酯 谷胱甘肽(GSSG比率

了解您感兴趣领域的代谢资源和应用:乐鱼体育是什么

代谢途径的表征

如何测量糖酵解

糖酵解是分解葡萄糖的代谢途径,产生丙酮酸和ATP和NADH形式的能量。葡萄糖是所有组织类型的主要燃料,因此所有细胞都利用糖酵解产生能量。在有氧环境下,丙酮酸从糖酵解进入TCA循环。当氧气有限时,丙酮酸随后转化为乳酸盐并分泌出来。

使用的分析方法:Lactate-Glo™试验而且Glucose-Glo™试验

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糖酵解是由t细胞激活引起的。用磁珠固定的CD3和CD28抗体激活培养的人外周血t细胞。在96小时的孵育过程中去除培养基中的小等分,葡萄糖消耗(橙色)和乳酸分泌(蓝色)分别用glucose - glo™和lactate - glo™监测。观察到的代谢特征是培养基中葡萄糖减少,乳酸增加

如何测量谷氨酰胺水解

谷氨酰胺分解是将谷氨酰胺分解成谷氨酸,然后转化为TCA循环代谢物的代谢途径。谷氨酰胺是血液中一种丰富的游离氨基酸,在癌症中谷氨酰胺水解可以被提高,以支持生物合成和肿瘤生长的提高。

测定方法:谷氨酰胺/ Glutamate-Glo™试验

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癌细胞谷氨酰胺代谢升高;随着细胞的生长,它们不断地消耗谷氨酰胺并分泌谷氨酸。SKOV-3卵巢癌细胞培养48小时。在规定的时间点去除2 μl等分介质。谷氨酰胺的消耗(蓝色)和谷氨酸分泌(黄色)使用谷氨酰胺/谷氨酸glo™测定法测定。红线表示RLU(相对发光单位)中介质控件的发光值。

如何测量脂肪变性和脂肪生成

脂肪生成是将碳水化合物前体转化为甘油三酯的代谢途径,甘油三酯是一种长期储存能量的分子。脂肪生成主要发生在脂肪细胞中。脂肪变性是肝细胞中循环甘油三酯的积聚,是肝脏疾病(NAFLD/NASH)的标志。

测定方法:Triglyceride-Glo™试验

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微组织(InSphero)在含生理(LG/LI)或超生理(LG/HI)水平葡萄糖和胰岛素的无血清培养基中孵育3天和10天,并补充与牛血清白蛋白(FFA)结合的游离脂肪酸或低密度脂蛋白血浆组分(LDL)。微组织在PBS中洗涤两次,并用甘油三酯- glo™测定法进行测定。数值绘制为每个显微组织(MT)的甘油三酯浓度。数据由瑞士苏黎世InSphero公司慷慨提供。

如何测量脂肪分解

脂肪分解是将甘油三酯分解为脂肪酸和甘油的代谢途径。该通路用于在禁食或长时间运动时释放储存的能量。脂肪分解主要发生在脂肪细胞中。

测定方法:Glycerol-Glo™试验

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胰岛素介导的脂肪细胞甘油释放抑制。3T3-L1 MBX细胞分化的脂肪细胞被异丙肾上腺素(25nM)和胰岛素(150nM)联合处理。处理90分钟后,从每口井中取出一份培养基样品。样品和甘油标准品使用甘油- glo™测定法进行分析。每种条件都进行了三次重复试验,误差条表示标准偏差。从脂肪细胞中释放的甘油是脂肪分解的代理。在这里,异丙肾上腺素刺激的脂肪分解被胰岛素抑制了两倍。

如何测量胰岛素的作用

胰岛素是控制餐后能量储存的激素。胰岛素通过与细胞上的受体结合,触发葡萄糖摄取,糖原合成,短期储存能量,甘油三酯合成,长期储存能量。当胰岛素作用不正常时(身体不能产生足够的胰岛素,或者身体对胰岛素没有反应),糖尿病就会发生。

使用的分析方法:葡萄糖吸收- glo™检测+Triglyceride-Glo™试验+Glycogen-Glo™试验

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引用:

抑制单羧酸转运蛋白1 (MCT1)促进3T3-L1脂肪细胞增殖,提高胰岛素敏感性。贝利等人。国际分子科学学报,2022,23(3),1901。

使用Promega测定法,作者测量了胰岛素刺激后3T3-L1细胞的葡萄糖摄取和甘油三酯含量。阅读报纸:https://doi.org/10.3390/ijms23031901


结合化验

同时监测多种代谢途径

通过从您的样品中并行分析多个代谢物,您可以全面了解在您的模型系统中哪个代谢途径最活跃。

基于路径的胶质母细胞瘤分类揭示了一种具有治疗弱点的线粒体亚型。

Garofano等人发表在《自然》杂志上的研究表明,恶性胶质母细胞瘤的亚型为癌症。利用单细胞RNA-seq,根据细胞代谢和发育特征确定了4种独特的肿瘤亚型。然后,使用六种不同的Promega代谢物测定法对每个亚组的患者衍生细胞模型中的活性代谢途径进行经验性验证(包括葡萄糖摄取、糖酵解、谷氨酰胺解、脂质代谢和氧化应激)。代谢谱还用于测试肿瘤亚型药物的疗效。

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设计实验

研讨会:如何将细胞代谢分析整合到你的研究中

许多研究人员选择在代谢研究的同时测定活性或毒性。同时进行,这些检测可以使结果正常化,并确认治疗后细胞仍然存活。

选择细胞活力或细胞毒性测定方法指南

如果您需要更多的信息,或需要帮助排除您的化验,我们的经验丰富技术服务科学家都可以帮助你得到你需要的结果。