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CRISPR DIY概述

如果你计划设计自己的crispr支持的工作流程,使用HiBiT标记来研究内源性蛋白质,你不必单独去做。利用我们的深入经验,以确保您得到您需要的结果。

CRISPR DIY过程总结

在创建您的敲入细胞系之前,您需要进行一些基因组分析,以确定Cas9切割位点的理想位置,并设计将重组插入HiBiT标签到所需基因组位置的供体DNA。以下是您将遵循的基本步骤,以及关于该过程的更详细指导。

  1. 设计和排序你的引导RNA,供体DNA和Cas9。
  2. 获得权利合成HiBiT标签。
  3. 与oligo供应商合作以获得所需的材料。
  4. 执行基因编辑步骤,将HiBiT标记添加到感兴趣的目标。
  5. 分析细胞池或进行克隆分离。

下载详细协议
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最新的研究

Promega的科学家们继续研究使用CRISPR-Cas9内源性标记HiBiT蛋白。阅读我们最近的研究项目,该项目展示了HiBiT敲入标记是如何广泛应用和可扩展的方法来分析内源性蛋白质,并展示了内源性标记与过表达模型相比的优势。

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不同结构和功能蛋白的内源性HiBiT标记。使用CRISPR/Cas9基因编辑对代表各种细胞功能的基因的内源性位点进行HiBiT标记。生物荧光成像用于验证表达的hibit标记蛋白通过显示预期的亚细胞定位准确反映自然生物学。

内源性蛋白质动力学研究

表达细胞内LgBiT蛋白用于HiBiT分析,可以实时测量内源性调控的HiBiT标记蛋白的丰度,以及在NanoBRET™应用中使用补充的HiBiT作为能量供体,从而获得更多的检测可能性。

  • 对hibit标记蛋白进行活细胞动力学分析;不需要细胞裂解
  • 与外源或内源表达的HiBiT融合蛋白兼容
  • 使用补充HiBiT作为活细胞NanoBRET™应用的能量供体

有几种工具可以将细胞内LgBiT合并到您的CRISPR/Cas9 HiBiT敲入工作流程中。

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PROTAC处理后内源性HiBiT-BRD4的降解动力学。HiBiT插入HEK293 LgBiT细胞系内源性BRD4位点。在含Nano-Glo®Endurazine™底物的co2无关培养基中滴定MZ1处理细胞。

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