CRISPR DIY概述

在创建敲入细胞系之前，您需要进行一些基因组分析，以确定Cas9切割位点的理想位置，并设计将重组以将HiBiT标记插入所需基因组位置的供体DNA。以下是您将遵循的基本步骤，以及关于该过程的更详细指导。

1. 设计和排序你的引导RNA，供体DNA和Cas9。
2. 获得权利来合成HiBiT标签
3. 与oligo供应商合作以获得所需的材料。
4. 执行基因编辑步骤，将HiBiT标记添加到感兴趣的目标。
5. 分析细胞池或继续进行克隆分离。

表达细胞内的LgBiT蛋白用于HiBiT分析，可以实时测量内源性调控的HiBiT标记蛋白的丰度，以及在NanoBRET™应用中使用补充的HiBiT作为能量供体，以获得更多的分析可能性。

• 对hibit标记蛋白进行活细胞动力学分析;不需要细胞裂解
• 与外源或内源表达的HiBiT融合蛋白相容
• 使用补充HiBiT作为活细胞NanoBRET™应用的能量供体

有几种工具可将细胞内LgBiT合并到CRISPR/Cas9 HiBiT敲入工作流程中。

了解一种简单有效的crispr介导的HiBiT标记方法，不需要分子克隆步骤，在短短24小时内带您从基因编辑到分析内源性生物学

了解如何用简单的发光信号检测和量化任何标记蛋白，并了解应用程序和检测格式选项。

全面讨论了蛋白质标签敲入的方法，以及测量内源性蛋白质功能的实验结果。