NAFLD和NASH肝病研究工具
包括非酒精性肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)在内的肝脏疾病是慢性疾病，没有有效的治疗方法。为了支持研究人员研究肝脏疾病，我们提供了简单、可靠的方法来测量细胞代谢、氧化应激和炎症。我们的分析使用发光技术进行敏感检测，协议快速和简单。
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什么是非酒精性脂肪肝(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)?
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一个总称，它描述了肝脏中脂肪(包括甘油三酯、游离脂肪酸和胆固醇)过度积累的一系列情况。NAFLD的两种类型是非酒精性脂肪肝(NAFL)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，前者的肝脏几乎没有炎症，后者的脂肪堆积伴随着炎症和肝损伤。如果未确诊，NAFLD可能最终发展为肝纤维化、肝硬化和原发性肝癌。
NAFLD非常常见，影响全球25%的成年人。然而，目前还没有fda批准的治疗此病的药物。该病很复杂，许多环境和遗传因素导致其起源和发展。更复杂的是，这种疾病的病理是全身性的，因为肝脏是许多代谢途径的枢纽。监测代谢途径和细胞健康的分析方法对于促进我们对NAFLD的了解和开发该疾病的治疗方法至关重要。
Promega分析为肝病研究提供了许多优势:
- 广泛的样本兼容性允许跨项目的连续性——从简单的细胞模型到复杂的3D类器官和组织样本。
- 发光检测灵敏，可精确监测生物变化。
- 宽线性范围捕获1000倍的代谢物浓度变化，无需任何样品稀释。
- 小型化允许在高通量格式中快速筛选抑制剂。
如何测量甘油三酯稳态和脂肪变性
NAFLD的标志性病理是肝细胞内甘油三酯的积累，也称为脂肪变性。过量的甘油三酯主要有两个来源。首先，膳食脂类和脂肪组织中的游离脂肪酸(FFA)通过脂肪生成转化为甘油三酯。其次，胰岛素抵抗促进了脂肪从头生成，即由碳水化合物合成甘油三酯。
你可以很容易地测量脂肪变性和脂肪生成Triglyceride-Glo™试验．它可以用于不同的样品类型，包括溶解细胞，培养基，组织匀浆，血清和脂蛋白组分。这种简单的免洗方案使用了敏感的生物发光检测，与染色、比色法或基于荧光板的检测相比，提供了更好的结果。该方法不需要繁琐的有机提取，而是使用快速的洗涤剂裂解步骤来制备脂质样品。类似地,Glycerol-Glo™试验可用于测量脂肪分解。
bsa结合的脂肪酸和脂蛋白通过脂肪生成刺激肝细胞内甘油三酯的积累。在这里，我们使用甘油三酯- glo™检测在几种治疗条件下和随时间变化的人类肝脏3D显微组织中监测甘油三酯含量。结果表明，甘油三酯- glo™检测可用于监测细胞模型中脂肪变性的进展。
人肝组织中的甘油三酯水平。3D InSight™人类肝脏微组织(InSphero)在无血清培养基中孵育3天和10天，无血清培养基中含有生理(LG/LI)或生理上(LG/HI)水平的葡萄糖和胰岛素，并补充与BSA (FFA)结合的游离脂肪酸或低密度脂蛋白血浆组分(LDL)。微生物组织在PBS中洗涤两次，并根据甘油三酯- glo™协议测定总甘油含量。数值绘制为每个显微组织(MT)的甘油三酯浓度。数据由瑞士苏黎世InSphero公司慷慨提供。
特色研究:评估NASH细胞模型的药物诱导毒性
Kermanizadehet al。本研究表明，在外源性肝损伤的强化中，已有的疾病是至关重要的。他们使用了Triglyceride-Glo™试验监测三维人类肝脏微观组织中的脂质积累，以及CellTiter-Glo®2.0监控能力。
如何测量葡萄糖代谢
在脂肪肝的肝细胞中，研究显示糖代谢发生变化，包括糖酵解增加，乳酸产生和糖异生。NAFLD的肝胰岛素抵抗导致了这种调节失调。我们提供了一套检测方法，使您能够以高灵敏度检测葡萄糖代谢的变化。
- 糖质新生，新的葡萄糖分子的合成，可以监测使用Glucose-Glo™试验．
- 糖酵解，葡萄糖分解为能量，可以用Glucose-Glo™和/或Lactate-Glo™化验。
- 糖原生成和肝糖分解，糖原的合成和分解，可以监测Glycogen-Glo™试验．
- 葡萄糖摄取率可以用葡萄糖Uptake-Glo™试验．
特色研究:了解二甲双胍的抗癌作用
蔡等．发现二甲双胍在降低HepG2细胞的化疗耐药方面具有有益作用，这可能有助于改善肝癌的化疗。他们使用了一系列的Promega测试(葡萄糖Uptake-Glo™，Glucose-Glo™，Lactate-Glo™而且辅酶ii / NADPH-Glo™测定HepG2肝细胞癌细胞的糖酵解。
海报:研究胰岛素作用和脂肪变性的生物荧光分析
参见生物发光分析如何用于测量胰岛素、胰高血糖素、脂肪分解和葡萄糖摄取的数据。
如何测量胆固醇和脂蛋白
NAFLD与肝脏胆固醇升高和脂蛋白产生的变化有关。的胆固醇/胆固醇Ester-Glo™试验可用于量化总胆固醇水平，游离胆固醇水平和胆固醇酯水平。简单的方案与细胞裂解物，组织，培养基，血清样品和脂蛋白兼容。
当肝脏中游离脂肪酸过载时，极低密度脂蛋白(VLDL)用于将游离脂肪酸输出到脂肪组织。因此，NAFLD患者血清中低密度脂蛋白(LDL和VLDL)增加，高密度脂蛋白(HDL)降低。在这里，我们使用胆固醇/胆固醇酯- glo™检测来测量人类脂蛋白样本的胆固醇含量。
测定购买的人高密度和低密度脂蛋白的总胆固醇(样品+酯酶)和游离胆固醇。浓度计算采用40μM胆固醇标准。相对光单位(RLU)值(以百万为单位)列在每条的顶部。
如何测量氧化应激和细胞死亡
氧化应激是NAFLD进展的主要因素。肝脏中的脂肪变性会导致线粒体功能障碍、内质网应激和脂肪毒性，所有这些都会导致活性氧(ROS)的产生。ROS的积累是有害的，会导致细胞损伤、死亡和肝纤维化。过量的ROS积累最终导致细胞死亡，这是NAFLD/NASH发病的另一个关键过程。的ROS-Glo™H2O2分析可用于测量细胞中的氧化应激。它采用灵敏的发光检测来测量H2O2用快速免洗协议。
在这里，我们展示了通过将ROS-Glo™与CellTox™绿色细胞毒性检测并行检测HepG2细胞中的氧化应激和细胞死亡。
HepG2细胞分别用产生ros的化合物(甲萘醌或邻苯三酚)或细胞毒性诱导试剂(洋地黄苷)处理，并在37℃下培养2小时。在给药时添加CellTox™绿色染料(膜不渗透DNA结合染料作为细胞毒性指标)和H₂O₂底物。孵育后测量来自CellTox™绿色染料的荧光，然后加入ROS-Glo™检测溶液。在孵育20分钟后测量ROS-Glo™检测试剂盒的发光信号。
如何使用三维细胞模型进行肝脏研究
为了了解NAFLD复杂的病理生理学，研究人员正在转向更多生理相关的3D细胞模型，如肝脏球形体和微观组织。有兴趣在3D肝脏模型中实现Promega分析吗?参见以下网络研讨会中的例子:
