新型冠状病毒血清及PCR检测
对SARS-CoV-2活性感染的精确分子检测和随后对抗病毒抗体存在的血清学检测是抗击COVID-19大流行的关键工具。基于聚合酶链反应的检测用于识别受感染的个体，为了了解已康复者的免疫反应，血清学检测是必要的。
分子检测和血清学检测的研究、开发和制造是全球许多实验室的重点。Promega为实验室设计、执行和leyu乐鱼网扩大基于pcr的分子检测、进行血清学检测和研究新的血清学检测方法提供产品和定制服务。
SARS-CoV-2 PCR和血清学分析靶点
SARS-CoV-2是阳性意义的单链RNA病毒。基因组已被证明与SARS-CoV具有79.6%的同源性，并且SARS-CoV-2病毒已被证明与相同的ACE2细胞表面受体结合(1,2)。
SARS-CoV-2基因组编码多种结构蛋白和非结构蛋白。结构蛋白包括穗蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)(1,3)。
病毒刺突蛋白的结构发表在2020年2月19日的《科学》杂志上(4)。刺突蛋白已被证明是与ACE2受体结合的位点，并且是中和抗体的潜在靶点(5,6)，也是可以阻止附着在靶细胞或ACE2受体内化的治疗靶点(7,8)。一些病毒蛋白也已成为使用抗病毒药物和其他治疗药物的潜在靶点(9)。
SARS-CoV-2血清学检测进展
基于pcr的方法只能告诉我们在取样时病毒是否存在于患者体内。它们不提供任何关于过去感染或抗sars - cov -2抗体存在的信息。需要血清学分析来回答这些关于个体暴露的重要问题，进行人群筛查和监测，并最终了解对这种疾病的适应性免疫反应。
目前，大量研究工作都是为了了解对SARS-COV-2的免疫反应，包括确定引起保护性反应的病毒抗原，以及开发检测抗SARS-COV-2抗体的血清学测试。
提供特定和敏感的血清学测试以证明存在病毒抗体，对于疫苗开发工作和了解个人是否安全不会再次感染至关重要。抗体检测需要能够特异性检测出针对SARS-CoV-2的抗体，且与其他冠状病毒没有交叉反应。
SARS-CoV-2与COVID-19患者的抗体反应
“世界各地的许多公司和研究团队正在努力开发血清学检测方法，以帮助我们抗击COVID-19。任何要广泛应用的检测都必须证明敏感性和特异性，并且必须有能力确定抗体水平是否真的对患者具有保护作用。”
-阿什·安德森普罗米加首席医疗官
血清学检测类型
有大量的COVID血清学测试进入市场，每天都有新论文发表，有助于获得越来越多关于SARS-CoV-2免疫反应的信息。对SARS-CoV的研究和对SARS-CoV-2的一些初步研究表明，核衣壳(N)和刺突(S)蛋白引起的抗体反应可能是保护性的，或者是疫苗开发的候选物(5-6,14-16)。许多进入市场的检测方法检测N或S蛋白的抗体(17)。一些研究表明，针对刺突蛋白的受体结合结构域(RBD)产生的抗体能够中和病毒(18-23)。目前正在进行研究，以回答关于SARS-CoV-2免疫的许多剩余问题，包括针对该病毒产生的IgG抗体是否具有长期保护作用。
ELISA-Type测试
市场上有许多ELISA或化学发光免疫分析方法使用病毒抗原捕获检测样本中的抗体，许多方法使用SARS-CoV-2突刺或核衣壳蛋白作为靶标。elisa型检测提供了量化抗体反应的优势，但比即时横向流动型检测需要更长的时间，因为它们涉及更多的试剂添加和洗涤步骤。
这是一个解释ELISA检测方法的视频．
横向流动测试
在横向流动测试中，样品被添加到含有胶体金标记的病毒抗原的固体支撑条上，抗人IgM和IgG位于条带的特定部分。样本中存在的抗sars - cov -2抗体与病毒抗原结合，然后在抗人抗体穿过测试条带时被捕获。可见的胶体金线出现，表明存在IgM或IgG抗体在测试样本。
这是一个解释横向流动测试的视频．
基于pcr的SARS-CoV-2检测方法
设计用于扩增sars - cov -2特异性序列的基于RT-qPCR的检测是目前用于检测活动性感染的主要方法。针对各种独特的SARS-CoV-2序列N、E、S和RdRp序列的测试可用(3,10)。使用两个或两个以上靶点的RT-qPCR检测可能具有更高的特异性。
世界卫生组织(世卫组织)已经发布摘要信息包括美国推荐协议在内的一些协议(11)。疾病预防控制中心新型冠状病毒(2019-nCoV)实时RT-PCR诊断面板用于初级诊断的引物包括用于核衣壳(N)基因不同区域的引物和探针，以及用于检测对照/临床样本中RNase P (RP)基因的附加引物/探针组(12,13)。
其他组织也发布了自己的工具包。2020年2月25日，Promega得到了认可联合诊断公司在生产新产品方面的支持Logix Smart™COVID-19测试该药物获得了CE标志批准，在欧洲可作为体外诊断药物使用。
Sanger测序用于SARS-CoV-2研究
桑格测序可以补充SARS-CoV-2研究和变异检测的其他技术。从规模较小的项目到NGS结果的确认，Sanger测序被认为是金标准和最广泛使用的DNA测序方法。
本应用说明提供了一个示例方案，用于对SARS-CoV-2基因组的一个区域进行测序ProDye™终结者测序系统用毛细管电泳对其进行分析Spectrum Compact CE系统．
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