Inflammasome激活
炎症小体是一种对病原体和其他压力源做出反应的大型蛋白质复合体。它激活炎症反应并诱导细胞死亡的一种形式的焦亡。一些自身炎症和自身免疫疾病与炎症小体的失调有关。
Promega提供了多种检测方法和技术来监测炎性小体激活，包括量化活细胞中NLRP3炎性小体NACHT结构域抑制剂的靶点参与，检测caspase-1激活，以及量化IL-1β释放。此外，我们还提供了一种检测细胞外ATP(一种已知的炎症小体触发器)的方法。
想了解更多关于炎症小体激活的知识吗?我们可以定制一个虚拟演示来回答您的问题。
激活的炎症小体招募caspase-1，并通过procaspase-1酶原转化为具有催化活性的caspase-1来激活它。Caspase-1的激活导致细胞因子IL-1β和IL-18的加工和释放，以及焦亡(细胞死亡的一种免疫原性形式)。
的Caspase-Glo®1化验足够敏感，可直接测量细胞或多孔板介质中的caspase-1活性。z - wehd -氨基荧光素的Caspase裂解释放氨基荧光素，导致荧光素酶活性，并通过专利的耐热重组荧光素酶产生光。
外周血单个核细胞中检测到Caspase-1活性。来自四供体池(BioIVT)的PBMCs在RPMI-1640 + 10% FBS 7.5 x 10中镀于96孔板中5细胞/ml，用LPS滴定过夜，然后用20 μ M奈尼霉素或对照剂处理2小时。用Caspase-Glo检测Caspase-1活性®1 Inflammasome化验。Caspase-Glo®1.加入试剂+/- YVAD-CHO，记录1.25 h后发光。
J774A中检测到Caspase-1活性。1巨噬细胞。鼠标J774A。5 × 10的1个细胞596孔板中DMEM + 10% FBS的细胞/ml, lps引物或不引物，然后用奈革霉素(20µM)处理。用Caspase-Glo®1炎症小体试验监测Caspase-1活性。加入Caspase-Glo®1试剂+/- YVAD-CHO, 1.5小时后记录发光。修改自O'Brien等(2017)j . Immunol。冰毒。447, 1-13。
IL-1β从pbmc中定量释放．来自四供体池(BioIVT)的PBMCs在5.5 x 10的RPMI-1640 + 10% FBS中被镀5细胞/毫升在96孔板和1.65 x 105384孔板，然后用LPS滴定过夜。第二天，用Lumit™IL-1β(人)免疫分析法直接在细胞孔中定量检测IL-1β的释放。
IL-1β从J774A中定量释放。1巨噬细胞。鼠标J774A。5 × 10的1个细胞596孔板中DMEM + 10%胎牛血清的细胞/ml, lps引物(500ng/ml)或不引物过夜，次日用奈革霉素(20 μ M)时间段处理。用Lumit™IL-1β(人)免疫分析法直接在细胞孔中定量检测IL-1β的释放。
了解更多关于Lumit™免疫测定用于细胞因子检测，包括il - 1β．
使用NanoBRET™靶点接触试验，您可以:
- 在活细胞中量化化合物亲和力(它与蛋白质结合的紧密程度)和目标蛋白质占用率(化合物与蛋白质结合的程度)。
- 评估化合物在生理条件下与目标蛋白结合的时间(停留时间)。
- 为您的研究扩展简单的多孔试验。
- 生成低错误率和高再现性的高质量数据。
NanoBRET™信号和示踪剂在活细胞中的特异性亲和力测定。HEK293细胞瞬时转染NLRP3/Nluc融合蛋白。转染24小时后，在存在或不存在大量未标记对照配体的摩尔过量情况下，用连续稀释的NLRP3 NanoBRET™示踪剂处理细胞。平衡2小时后，加入NanoBRET™靶接合底物/抑制剂溶液，并将BRET记录在GloMax®Discover Plate Reader上。
测定活细胞中未标记化合物与NLRP3的接合。HEK293细胞瞬时转染NLRP3/Nluc融合蛋白。转染24小时后，在序列稀释的MCC950存在下，用序列稀释的NLRP3 NanoBRET™示踪剂处理细胞。平衡2小时后，加入NanoBRET™靶接合底物/抑制剂溶液，并将BRET记录在GloMax®Discover Plate Reader上。
联系我们申请NLRP3目标接触试验，可通过
我们的精英准入计划。
细胞外ATP监控
细胞外ATP可以作为损伤相关的分子模式(DAMP)，是炎症小体激活的触发器。RealTime-Glo™细胞外ATP检测是一种生物发光检测，设计用于动态监测死亡、应激或激活细胞释放的ATP。
参观产品页面为更多的信息。
实时细胞外ATP测量。U937细胞用稀释的米托蒽醌(一种蒽环类药物，可诱导免疫原性细胞死亡(ICD))处理。加入RealTime-Glo™细胞外ATP检测试剂，将检测板置于37°C的读板器中。每10分钟收集一次发光，持续24小时。