记者化验

报告分析提供了一种容易测量生物反应的方法。有许多可用的报告基因，如碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，荧光蛋白和荧光素酶。荧光素酶用于创建生物发光报告分析方法，该方法定量高，在广泛的动态范围内敏感，并易于通过测量光输出检测。有许多不同的生物发光类别，都是基于酶荧光素酶与发光底物的相互作用产生光。在基因报告应用中使用最广泛的荧光素酶是甲虫荧光素酶(包括萤火虫荧光素酶)，Renilla荧光素酶和修饰的深海虾荧光素酶(NanoLuc®荧光素酶)。

为了建立荧光素酶报告试验，使用瞬时或稳定转染等方法将荧光素酶基因报告导入细胞。细胞内荧光素酶的定量通常通过添加含有洗涤剂的缓冲溶液来溶解细胞和荧光素酶底物来启动发光反应。每个样品的荧光素酶含量可能只有10-20摩尔或更少。这相当于每个细胞大约有10个分子，为荧光素酶测定提供了一个广泛的线性动态定量范围。荧光素酶的分泌形式可以通过对培养基取样和在一个单独的平板上运行荧光素酶测定法来测定。一些细胞内荧光素酶，如NanoLuc®和Renilla荧光素酶，可以在不裂解细胞的情况下检测，以建立活细胞报告测定法，测量细胞反应的动力学。

大多数报告基因检测涉及一个或两个报告基因。通常情况下，第二个报告器由一个“控制”向量表示，以规范化实验报告器的结果。例如，第二个报告基因可以控制细胞数量或转染效率的变化。通常情况下，控制报告基因由组成启动子驱动，控制载体与“实验”载体共转染。不同的报告基因用于对照和实验载体，以便分别测定两个报告产物的相对活性。leyu乐鱼网参观分析方法选择指南有关如何根据您的需要选择最佳报告试验的更多信息。