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细胞凋亡检测基础知识
细胞凋亡,或程序性细胞死亡,消除受损,感染或多余的细胞。细胞凋亡与不同的形态学变化有关,包括细胞收缩、染色质凝结、核膜完整性丧失、质膜起泡和凋亡小体的形成。其他类型的细胞死亡包括坏死,它发生在细胞损伤后,比凋亡更不受调控。了解细胞死亡是否是凋亡的结果,对于理解发育途径、小分子和大分子(生物制剂)药物的作用机制以及免疫系统的相关功能都很重要。
细胞凋亡分析通常检测生化和细胞事件,指示凋亡通路的激活。效应物(如caspase-3)的激活导致常见的凋亡事件,如质膜外表面磷脂酰丝氨酸的暴露(通常通过annexin V结合测量),细胞内平衡和修复酶的裂解(例如,通过抗体技术测量聚[adp -核糖]聚合酶[PARP])和核小体间DNA碎片(通常通过TUNEL测定)。Caspase-3的激活被认为是凋亡细胞死亡的全部过程。具体发生哪些事件取决于激活的凋亡通路。
通常,需要不止一种方法来确认细胞死亡是通过凋亡发生的。凋亡的标记物如caspase活性可能只是短暂表达。因此,要确定细胞凋亡是否是细胞死亡的主要机制,了解模型系统中细胞死亡过程的动力学是至关重要的。实时活细胞分析监测凋亡事件随时间的推移。多种方法也可用于评估凋亡通路内事件的时间。