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LDH-Glo™细胞毒性试验

J2380_LDH-Glo细胞毒性测定-10ml_3
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简单,更敏感的乳酸脱氢酶测定方法,以确定细胞毒性

  • 检测少量细胞的LDH释放,包括3D细胞模型
  • 随着时间的推移,监测同一样品的细胞毒性
  • 通过与其他基于细胞的分析的多路复用,每口井提供更多的数据

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LDH-Glo™细胞毒性试验
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从少量细胞中监测细胞毒性

LDH- glo™细胞毒性检测是一种基于生物发光板的检测方法,用于定量质膜损伤时乳酸脱氢酶(LDH)释放到培养基中。生物发光检测比比色法或荧光法更敏感,允许从少量细胞(包括原代细胞和3D细胞培养物)中准确检测LDH。

这种乳酸脱氢酶测定只需要从每个处理孔中去除少量的细胞培养基(2-5 μ l),允许您随着时间的推移对同一孔进行采样,并使用剩余的培养基和细胞进行其他基于细胞的测定,从而获得更多的数据。

检测方法的工作原理

受损细胞释放的LDH催化乳酸的氧化,同时NAD+还原为NADH。还原酶利用NADH和还原酶底物生成荧光素,通过Ultra-Glo™rLuciferase将荧光素转化为生物发光信号。所产生的发光信号与乳酸脱氢酶的含量成正比。
乳酸脱氢酶检测LDH-Glo细胞毒性试验15079ma-w

“Promega LDH-Glo™试剂盒是一种可靠且易于跟踪的试剂盒,用于测量细胞死亡。我们在实验室中使用这种方法,与其他方法相比,它确实有助于我们获得可靠的数据。总的来说,我们强烈推荐这个工具包。”


LDH-Glo客户

在3D细胞培养中监测细胞毒性

LDH- glo™细胞毒性试验非常适合于测量从少量膜损伤细胞中释放的LDH。这里有一个测量HCT116球体药物诱导毒性的例子。时间依赖性毒性测量是通过从同一井中重复采样介质进行的。
使用生物发光ldh法15086mb-wb测定HCT116球体的药物诱导毒性
在康宁384孔超低附着板中使用2500个细胞/孔形成HCT116球状体,并用阿霉素处理。在指定的时间点从同一孔中收集2.5µl样品,并以1:10稀释度冷冻在LDH存储缓冲液中。样品在LDH储存缓冲液中解冻并进一步稀释2.5倍,然后测量LDH水平。
查看更多数据:了解如何将此测定方法与不同的模型系统一起使用,包括SKBR3细胞以评估抗体药物偶联物,以及在3D人类肝脏微组织中随时间监测细胞毒性,详见海报:新的敏感发光ldh释放检测方法,能够从单个3D微组织中“实时”采样在2018年的SLAS Europe上发表。

ADCC检测中靶细胞的细胞毒性

LDH-Glo™细胞毒性试验可用于评估由于生物制剂治疗的许多作用机制导致的细胞死亡,包括补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和抗体-药物偶联细胞毒性。在本例中,使用利妥昔单抗生物试剂盒检测ADCC对靶细胞的杀伤。
使用生物发光ldh测定方法15087mb-wa检测ADCC实验中靶细胞的细胞毒性
细胞以20:1的效应(PBMC):靶(Daudi)比例镀膜,用不同浓度的利妥昔单抗(RTX)处理3个重复4或6小时。从同一孔中取出培养基样品(2.5µl),稀释到LDH存储缓冲液(47.5µl)中并冷冻。将25 μ l解冻样品加入等体积的LDH检测试剂中,室温孵育60分钟后记录发光。绘制利妥昔单抗与RLU的浓度曲线,数据拟合4PL曲线计算EC50
ADCC实验中靶细胞的细胞毒性检测使用生物发光ldh测定方法15087mb-wb
对照孔的RLU值(与利妥昔单抗治疗在同一平板上进行)表明,仅来自靶细胞或效应细胞的发光信号很小,并且需要添加利妥昔单抗才能杀死细胞。ADCC =效应细胞+靶细胞+ RTX。RLU =相对发光单位。

规范

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还原酶底物

G885A 1 × 55μl

乳酸脱氢酶

J195A 1 × 1个

LDH检测酶混合物

J238A 1 × 10ml

SDS

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分析证书

按地段编号查册

使用限制

仅供研究使用。不用于诊断程序。

储存条件

AA

专利及免责声明

美国帕特。编号9,273,343和9,951,372,欧洲帕特。2751089号,日本派。专利号6067019等多项专利申请中。

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还原酶底物

G885B 1 × 275μl

乳酸脱氢酶

J195A 1 × 1个

LDH检测酶混合物

J238B 1 × 50ml

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