Caspase-Glo®1炎症小体分析| NLRP3 | Caspase-1分析

测量细胞或培养基中Caspase-1活性，不需要样品准备

Caspase-Glo®1炎症小体试验是一种简单、均匀的生物发光方法，可选择性地测量caspase-1的活性，这是炎症小体的基本成分。

炎症小体是由多种炎症刺激引起的蛋白质复合体。先天免疫细胞通过炎症小体的形成和procaspase-1酶原转化为具有催化活性的caspase-1来应对病原体和其他危险信号。Caspase-1的激活导致细胞因子IL-1β和IL-18的加工和释放，以及焦亡(细胞死亡的一种免疫原性形式)。Caspase-Glo®1检测足够敏感，可以直接测量细胞或多孔板介质中的caspase-1活性。

它是如何工作的

在caspase裂解Z-WEHD底物(Z-WEHD-氨基荧光素)后，荧光素酶(氨基荧光素)的底物被释放，导致荧光素酶活性，并通过专利的、耐热的重组荧光素酶产生光。

快速和简单的

不需要样品制备或操作。简单地添加，混合，然后测量发光后仅一个小时。与传统的Western blot和ELISA分析相比，您可以在更少的步骤中更快地得到结果。稳定的发光信号和大体积(100ml)格式支持高通量筛选应用。

选择性和定量

选择性caspase-1底物(Z-WEHD)能够检测细胞或培养基中的催化活性caspase-1，并定量测量炎症小体活性。在试剂中加入蛋白酶体抑制剂MG-132可以消除非特异性蛋白酶体底物的切割，从而能够灵敏地检测caspase-1。该方法包括一种caspase-1特异性抑制剂(Ac-YVAD-CHO)，以确认平行样品的特异性活性，并将caspase-1活性与其他caspase活性区分开来。

Caspase-1活性区别于其他caspase

在等摩尔浓度下用+/ - Ac-YVAD-CHO测定炎症和凋亡caspase，并在20分钟后测定caspase活性。Ac-YVAD-CHO在1 μ M时抑制了99%的caspase-1活性，而对其他交叉反应的caspase(5,3,6)的影响最小。

NLRP3抑制剂可阻止THP-1和PBMC细胞中Caspase-1的激活

NLRP3通过启动炎症小体的组装来响应各种危险信号，在免疫感知中起着关键作用。NLRP3炎性小体触发caspase-1激活和IL-1β细胞因子分泌，最终导致炎性细胞死亡。Caspase-Glo®1检测可以方便地测量NLRP3抑制剂对原代细胞中caspase-1激活的影响。

THP-1细胞

PMA诱导THP-1细胞分化3天。更换培养基，加入MCC950 (NLRP3炎症小体抑制剂)，然后加入LPS或对照剂。LPS处理3小时后，取出一半的培养基(50µl)，用Caspase-Glo检测^®1试剂或Caspase-Glo^®1试剂+ YVAD-CHO。

PBMC细胞

PBMCs被镀，然后用MCC950处理，然后用LPS或载药处理过夜。隔夜处理后，细胞用奈革霉素或对照剂处理。在LPS启动后，尼日尔霉素引起钾外流和显著的caspase-1激活。然后取出一半的培养基(50 μ l)，用Caspase-Glo检测^®1试剂或Caspase-Glo^®1试剂+ YVAD-CHO。1小时后观察发光。Caspase-Glo®1信号表明，NLRP3炎症小体抑制剂对caspase-1活性具有剂量依赖性抑制作用。

外周血单个核细胞Caspase-1活性检测及释放到培养基

Caspase-Glo®1炎症小体检测监测外周血单个核细胞(PBMC)上清中的caspase-1活性。用LPS或不用LPS刺激细胞，然后用ATP刺激细胞30分钟。然后将细胞制成球团，检测上清中caspase-1活性。

与其他基于细胞的分析的多重

Caspase-Glo®1检测足够敏感，可以从少量转移的培养基中检测caspase-1活性。这样可以保持细胞的完整性，以便进行其他分析，如细胞活力或细胞毒性，因此每个样本可以获得更多的数据。

Caspase-Glo®1炎症小体检测与细胞活力和细胞死亡检测相结合。THP-1细胞在添加10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养，在37°C和5% CO培养箱中培养₂．细胞以5 × 10的速度添加到平板上⁵在96孔板中用PMA (20nM, 3天)进行分化，然后用鞭毛蛋白(1µg/ml, 1小时)或尼日霉素(20µM, 2小时)处理。在板一个细胞中加入CellTox™绿色试剂、Caspase-Glo®1试剂或Caspase-Glo®1 YVAD-CHO试剂，90分钟后记录荧光(CellTox™绿色)或发光(Caspase-Glo®1)。在面板B用CellTiter-Glo®或RealTime-Glo™MT细胞活力测定法监测细胞活力。分别在10分钟和90分钟记录发光。

看到更多的数据：
这篇同行评议的论文展示了Caspase-Glo®1检测如何能够特异性地检测炎症小体诱导性物质处理过的细胞中的caspase-1活性，确认单信号和双信号炎症小体激活机制，并监测caspase-1活性、细胞死亡和IL-1β从同一微板孔释放。

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协议

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Caspase-Glo®1炎症小体分析PDF（1759KB）- - - - - -英语

盒子里是什么?

项	部分#	大小	浓度
mg - 132抑制剂	G932B	2×30μl
Z-WEHD衬底	G991A	1 × 1瓶
Ac-YVAD-CHO	G992A	1×10μl	2毫米
Caspase-Glo®1缓冲	G994A	1×10毫升

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使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

储存条件

专利和免责声明

美国帕特。no . 7,148,030、7,384,758、7,666,987和8,071,328等专利和未决专利。

盒子里是什么?

项	部分#	大小	浓度
mg - 132抑制剂	G932C	1×300μl
Z-WEHD衬底	G991A	5 × 1瓶
Ac-YVAD-CHO	G992A	5×10μl	2毫米
Caspase-Glo®1缓冲	G994A	5×10毫升

SDS

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按地段编号查册

使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

储存条件

专利和免责声明

美国帕特。no . 7,148,030、7,384,758、7,666,987和8,071,328等专利和未决专利。

盒子里是什么?

项	部分#	大小	浓度
Caspase-Glo®1缓冲	G994B	1×100毫升
mg - 132抑制剂	G932C	2×300μl
Z-WEHD衬底	G991B	1 × 1瓶
Ac-YVAD-CHO	G992B	1×100μl	2毫米

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仅供研究用途。不用于诊断程序。

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专利和免责声明

美国帕特。no . 7,148,030、7,384,758、7,666,987和8,071,328等专利和未决专利。

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胆汁酸类似物是pyrin炎症小体的激活物。

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2019生物。化学。
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