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GSH-Glo™谷胱甘肽测定

V6911_GSH-Glo——Glutathione-Assay 10 ml_3
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谷胱甘肽(GSH)的荧光定量检测方法

  • 测量细胞和组织中减少(GSH)或总(GSSG + GSH)谷胱甘肽
  • 直接从细胞培养孔中测量谷胱甘肽水平
  • 灵敏度高,易于扩展

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GSH-Glo™谷胱甘肽测定
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敏感检测细胞中总谷胱甘肽和还原性谷胱甘肽

GSH- glo™检测是一种基于发光的检测方法,用于检测和定量细胞或各种生物样品中的谷胱甘肽(GSH)。在评估毒理学反应和氧化应激指标时,谷胱甘肽水平的变化是重要的,氧化应激可能导致细胞凋亡或细胞死亡。谷胱甘肽检测方法是基于在谷胱甘肽存在的情况下,将荧光素衍生物转化为荧光素。该反应由试剂盒中提供的谷胱甘肽s -转移酶(GST)酶催化。在使用Ultra-Glo™重组荧光素酶的耦合反应中检测形成的荧光素,该荧光酶产生的发光类型与细胞中存在的谷胱甘肽的数量成正比。谷胱甘肽检测方法为比色法和荧光法提供了一种简单、快速和灵敏的替代方法,可以很容易地适应于高通量应用。

想测量还原性谷胱甘肽与氧化性谷胱甘肽的比例吗?


谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验是一种可以量化培养细胞中总谷胱甘肽(GSH + GSSG)、GSSG和GSH- GSSG比的发光检测方法。了解更多

GSH-Glo™谷胱甘肽检测

谷胱甘肽测定分两步进行。在第一步中,细胞在荧光素- nt底物和谷胱甘肽s -转移酶的存在下被裂解。细胞中的谷胱甘肽驱动荧光素的形成。第二步,加入荧光素检测试剂,产生的光与反应中GSH的含量成正比。

处理细胞中谷胱甘肽的消耗和恢复

HeLa细胞(5000细胞/孔,96孔格式)暴露l-Buthionine-sulfoximine (BSO)。BSO抑制谷胱甘肽合成,从而降低细胞谷胱甘肽水平。

20小时BSO:用BSO处理的细胞,20小时后测定GSH。

BSO +复苏:用BSO处理细胞20小时,然后用PBS洗涤2倍,再用不含BSO的新鲜培养基覆盖。细胞在40小时后检测谷胱甘肽。

40小时BSO:用BSO处理的细胞,冲洗20小时,加入新鲜培养基和BSO。细胞在40小时后检测谷胱甘肽。

与传统的谷胱甘肽检测方法相比,简单的两试剂加谷胱甘肽检测方法减少了检测步骤的数量,很容易适应高通量应用。不需要去除蛋白质的步骤,结果在30分钟内就能达到。

GSH-Glo™谷胱甘肽检测的发光方法避免了与其他方法相关的固有背景荧光,从而提供了优异的信号与背景比。半衰期大于5小时的结果是稳定的信号,可以使用GSH-Glo™检测一次性批量处理多个板。

推荐使用GSH-Glo™测定法测定样品中的总谷胱甘肽水平。为了测量这个比率,我们推荐谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验

对乙酰氨基酚对肝细胞谷胱甘肽的消耗

用GSH- glo谷胱甘肽法测定24孔板贴壁细胞裂解物中的谷胱甘肽水平。谷胱甘肽浓度由生物发光系统生成的谷胱甘肽标准曲线插值确定。在P450诱导剂30 μM孕烯醇酮16a-羰腈(PCN)处理2天后,5mM对乙酰氨基酚(APAP)暴露3小时后GSH显著降低,而单独暴露APAP或PCN对GSH水平影响不大。

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酯酶重组缓冲液

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Luciferin-NT

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GSH-Glo™反应缓冲区

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谷胱甘肽S-Transferase

V689A 1×100μl

谷胱甘肽,5毫米

V690A 1×100μl

荧光素检测试剂

V859A 1 × 1

SDS

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按地段编号查册

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仅供研究用途。不用于诊断程序。

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酯酶重组缓冲液

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Luciferin-NT

V687B 1×500μl

GSH-Glo™反应缓冲区

V688B 1×50毫升

谷胱甘肽S-Transferase

V689B 1×500μl

谷胱甘肽,5毫米

V690A 1×100μl

荧光素检测试剂

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