GSH/GSSG- glo™检测是一种基于发光的系统,用于检测和量化培养细胞中的总谷胱甘肽(GSH + GSSG)、GSSG和GSH- GSSG比。还原性谷胱甘肽(GSH)和氧化性谷胱甘肽(GSSG)都存在于健康细胞中,其中大部分以还原性谷胱甘肽(GSH)形式存在。GSH和GSSG水平的变化在评估毒理学反应和氧化应激指标时非常重要,氧化应激可能导致细胞凋亡或细胞死亡。GSH和GSSG检测方法提供了一种简单、快速的多孔板格式,其中稳定的发光信号与培养孔中样品的总GSH或GSSG浓度直接相关。
总谷胱甘肽和GSSG的测定都是基于这样的反应:谷胱甘肽探针,荧光素- nt,通过谷胱甘肽- s -转移酶的GSH依赖转化为荧光素,并与萤火虫荧光素酶反应耦合。来自荧光素酶的光依赖于形成的荧光素的数量,而形成的荧光素又依赖于存在的谷胱甘肽的数量。这使得发光信号与谷胱甘肽的含量成正比。测定谷胱甘肽总量和GSSG的量是在平行反应中进行的。在一种配置中,检测试剂使用还原剂测量总谷胱甘肽,还原剂将细胞裂解液中的所有谷胱甘肽、谷胱甘肽和谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽。在第二种配置中,检测试剂仅用于测量氧化形式的GSSG。在这种情况下,加入一种试剂,在保持GSSG完整的情况下阻断所有GSH。这个阻断步骤之后是一个还原步骤,将GSSG转化为GSH,用于在发光反应中定量。由于测定是直接在培养孔中的细胞上进行的,GSH或GSSG的损失被最小化,减少了变异。