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谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验

V6611_GSH-3aGSSG-Glo——分析——10 ml_3
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一种基于发光的检测和量化总谷胱甘肽比率的方法

  • 测量生理相关的谷胱甘肽/谷胱甘肽比值
  • 简单的协议使样本处理最小化,减少了可变性
  • 稳定的分析信号适合高通量分析

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谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验
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谷胱甘肽(gsh - gssg)比值的有价值测量

GSH/GSSG- glo™检测是一种基于发光的系统,用于检测和量化培养细胞中的总谷胱甘肽(GSH + GSSG)、GSSG和GSH- GSSG比。还原性谷胱甘肽(GSH)和氧化性谷胱甘肽(GSSG)都存在于健康细胞中,其中大部分以还原性谷胱甘肽(GSH)形式存在。GSH和GSSG水平的变化在评估毒理学反应和氧化应激指标时非常重要,氧化应激可能导致细胞凋亡或细胞死亡。GSH和GSSG检测方法提供了一种简单、快速的多孔板格式,其中稳定的发光信号与培养孔中样品的总GSH或GSSG浓度直接相关。

总谷胱甘肽和GSSG的测定都是基于这样的反应:谷胱甘肽探针,荧光素- nt,通过谷胱甘肽- s -转移酶的GSH依赖转化为荧光素,并与萤火虫荧光素酶反应耦合。来自荧光素酶的光依赖于形成的荧光素的数量,而形成的荧光素又依赖于存在的谷胱甘肽的数量。这使得发光信号与谷胱甘肽的含量成正比。测定谷胱甘肽总量和GSSG的量是在平行反应中进行的。在一种配置中,检测试剂使用还原剂测量总谷胱甘肽,还原剂将细胞裂解液中的所有谷胱甘肽、谷胱甘肽和谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽。在第二种配置中,检测试剂仅用于测量氧化形式的GSSG。在这种情况下,加入一种试剂,在保持GSSG完整的情况下阻断所有GSH。这个阻断步骤之后是一个还原步骤,将GSSG转化为GSH,用于在发光反应中定量。由于测定是直接在培养孔中的细胞上进行的,GSH或GSSG的损失被最小化,减少了变异。

不同细胞系GSH/GSSG比值的测定

细胞系 细胞/好 谷胱甘肽(GSSG比例
车辆 甲萘醌
海拉 5000年 63.8 2.2
HepG2 10000年 92.6 2.2
HepaRG® 50000年 35.3 2.5
A549 5000年 87.9 10.9
大鼠肝细胞 50000年 19.8 1.1

谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验。GSH依赖的GSH探针,荧光素- nt,通过谷胱甘肽s -转移酶转化为荧光素,与萤火虫荧光素酶反应耦合。

还原性(GSH)和氧化性(GSSG)谷胱甘肽的检测极限

谷胱甘肽(板一个)及GSSG (面板B)标准品在96孔板中使用GSH/GSSG-Glo™测定法和GloMax®光度计进行测定。结果被平均并绘制在上面的图表上。生成一条线性趋势线,并计算相关系数以拟合数据的趋势线。检出限为2.5nM GSH和0.5nM GSSG。

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