克隆和DNA标记

亚克隆是分子生物学中的一个基本步骤，用于将插入物从一个载体移动到另一个载体，以获得所需的功能并表征感兴趣的DNA序列。

完成DNA插入转移的一种方法是使用限制性内切酶来消化片段和目标载体，目标载体通常是质粒。通过将消化样品的预期大小与DNA标记片段进行比较，可以确定是否消化成功。这是通过在琼脂糖凝胶上运行样品，按大小分离DNA片段来完成的。然后使用T4 DNA连接酶将所需的片段“粘贴”到消化的质粒中。

下一步是转型。用质粒转化细菌是很重要的，因为细菌被用作储存和复制质粒的手段。大肠杆菌如果细胞的细胞壁发生改变，使DNA更容易通过，那么细胞就更有可能吸收外来DNA。这样的细胞被称为能态细胞。选择已成功转化的细胞是通过对感兴趣的质粒进行抗生素选择来完成的。

有许多方法可以确认转移是否成功，包括PCR、限制性内切酶消化或测序。一旦确认，重组载体可用于多种应用，如蛋白质表达或RNA转录。