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克隆与DNA标记

修饰核酸的工具为亚克隆等许多分子生物leyu体育靠谱吗学技术提供了基础。对于传统的DNA片段克隆,我们提供了多种限制性内切酶和T4 DNA连接酶。对于细菌转化,我们提供了一个称职的细胞选择,包括我们独特的单步KRX菌株。

对于其他克隆应用,我们提供T4 DNA激酶,小牛碱性磷酸酶和其他修饰酶。对于RNA转录,T7, SP6和T3 RNA聚合酶是可用的。

包括台式和阶梯在内的各种DNA/RNA标记可以证实实验成功。

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克隆和DNA标记简介

亚克隆是分子生物学中的一个基本过程,用于将插入物从一个载体移动到另一个载体,以获得所需的功能并表征感兴趣的DNA序列。

完成DNA插入物转移的一种方法是使用限制性内切酶来消化片段和目标载体(通常是质粒)。通过将消化样品的预期大小与DNA标记片段进行比较,可以确认消化是否成功。这是通过在琼脂糖凝胶上运行样本,按大小分离DNA片段来完成的。然后使用T4 DNA连接酶将所需的片段“粘贴”到已消化的质粒中。

下一步是转型。细菌与质粒的转化是重要的,因为细菌被用作储存和复制质粒的手段。大肠杆菌如果细胞的细胞壁发生改变,DNA更容易通过,细胞就更有可能吸收外源DNA。这样的细胞被认为是有能力的。对已成功转化的细胞的选择是通过对相关质粒的抗生素选择来完成的。

有许多方法可以确认转移是否成功,包括PCR、限制性内切酶消化或测序。一旦确认,重组载体可用于各种应用,如蛋白质表达或RNA转录。