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葡萄糖Uptake-Glo™试验

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一种测量细胞内葡萄糖摄取的简单、非放射性测定方法

  • 均匀的协议
  • 实现宽线性的灵敏度
  • 可靠和可重复的结果

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葡萄糖Uptake-Glo™试验
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测量葡萄糖摄取

葡萄糖代谢是许多生物体内的一个关键过程。胰岛素刺激的葡萄糖摄取不足与2型糖尿病有关,而高葡萄糖摄取是与癌症相关的高糖酵解率的标志。测量葡萄糖的摄入量可以确定各种治疗糖尿病和癌症的效果。

测定葡萄糖摄取的金标准方法依赖于检测放射性标记的葡萄糖类似物。替代的比色法和荧光法葡萄糖摄取测定法往往缺乏可靠测量细胞中葡萄糖摄取所需的灵敏度和稳健性。

一种简单的非放射性葡萄糖摄取测定方法

葡萄糖吸收glo™检测是一种基于平板的均匀生物发光方法,基于2-脱氧葡萄糖-6-磷酸(2DG6P)检测,用于测量细胞中的葡萄糖吸收。

  • 简单,均匀的协议:添加2DG后,没有清洗步骤,所有步骤都是添加。
  • 灵敏度高,线性宽:葡萄糖吸收- glo™检测可以检测0.5-30µ的m2dg6p,并产生一个信号到背景> 3,仅需要5000个细胞。
  • 兼容自动化:“添加-混合-测量”格式与自动化和高吞吐量的工作流程兼容;反应可在96孔和384孔板中伸缩使用。
  • 可靠的和可再生的:葡萄糖吸收- glo™试验产生Z因子> 0.5

“Promega的leyu乐鱼网产品很可靠,可以毫不犹豫地购买。我的实验非常顺利,正如预期的那样,我们有更多的计划,使用葡萄糖吸收- glo™检测进行吸收实验。”


Vivek Pandey博士,肯塔基大学博士后学者。
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葡萄糖吸收- glo检测与常规放射性方法的比较

2-脱氧葡萄糖(2DG)被运输到细胞内并被磷酸化产生2-脱氧葡萄糖-6-磷酸(2DG6P)。Stop Buffer的加入可以阻止2DG的运输,溶解细胞,破坏细胞内的NADPH并使蛋白质失活。在加入2DG6P检测试剂之前,加入中和缓冲液使溶液中和。试剂内的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)将2DG6P氧化为6-磷酸脱氧葡萄糖酸盐(6PDG),将NADP+还原为NADPH。还原酶利用NADPH将原萤光素转化为萤光素,然后萤光素酶利用原萤光素产生光。

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测量癌症和脂肪细胞的代谢变化

MCF7癌细胞

在癌症模型中,当细胞缺氧时,缺氧条件将细胞代谢从氧化磷酸化转变为糖酵解。这就导致了葡萄糖摄取的增加。

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在缺氧(1%氧气)条件下生长的MCF7细胞显示葡萄糖吸收- glo™增加,表明糖酵解速率增加。使用RealTime-Glo™和CellTiter-Fluor™检测结果显示,同样的细胞活力没有显著变化。


脂肪细胞的细胞

使用脂肪细胞模型,我们证明了3T3L1-MBX脂肪细胞葡萄糖摄取的变化对细胞健康没有显著影响。将RealTime-Glo™检测与葡萄糖摄取- glo™检测相结合,将葡萄糖摄取的直接影响与对细胞健康的整体影响分离开来。

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当脂肪细胞在各种条件下处理时,葡萄糖吸收- glo™检测的结果,其中“None”表示葡萄糖摄取的基础水平。胰岛素诱导葡萄糖转运体向细胞表面转移,从而增加葡萄糖摄取高于基础水平。细胞松弛素B是一种葡萄糖转运蛋白抑制剂,可降低葡萄糖的摄取。LY294002是一种磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂,是一种必需的胰岛素信号转导酶,与单独的胰岛素相比,它能减少葡萄糖的摄取。

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当脂肪细胞在各种条件下处理时,RealTime-Glo™检测的结果,其中“None”表示葡萄糖摄取的基础水平。尽管葡萄糖摄取有显著的变化,如伴随的面板所示,但根据RealTime-Glo™测定,生存能力有最小的变化。

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2 dg

J156A 1×250μl

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