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Glutamate-Glo™试验

从各种生物样品中检测谷氨酸

  • 支持高吞吐量格式
  • 甚至检测细胞内的谷氨酸水平
  • nM范围内的检测极限

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生物样品中谷氨酸的生物发光检测

谷氨酸是一种重要的代谢物,是合成核酸、核苷酸和蛋白质的前体。leyu体育靠谱吗谷氨酸也是神经细胞中的一种关键神经递质。谷氨酸产量上调被用作癌细胞对谷氨酰胺水解依赖性增加的标志,以支持高增殖率。谷氨酸- glo™检测是一种适用于测量各种样品中谷氨酸水平变化的检测方法,该检测方法足够敏感,甚至可以检测到细胞内的谷氨酸含量。

化验是如何工作的

谷氨酸脱氢酶利用谷氨酸和NAD+合成α-酮戊二酸和NADH。在NADH存在的情况下,原荧光素还原酶底物被还原酶转化为荧光素,然后被Ultra-Glo™重组荧光素酶使用产生光。

当以1:1的比例将含有谷氨酸脱氢酶(GlutDH)、NAD+、还原酶、还原酶底物和荧光素酶的谷氨酸检测试剂加入到含有谷氨酸的样品中时,酶偶联反应开始并同时进行。发光信号与样品中谷氨酸的含量成正比,并不断增加,直到谷氨酸全部被消耗掉,此时达到稳定的发光信号。

发光信号与谷氨酸含量成正比

13899 ma-w
谷氨酸滴定曲线。按照技术手册TM495中的描述制备谷氨酸稀释剂,并进行谷氨酸- glo™检测。

灵活的吞吐量和流程

谷氨酸glo™检测是一种多功能系统,适用于高通量格式,并与多种样品类型兼容。样品可能需要预先处理样品,包括稀释,以适应测定的线性范围。它们可能还需要内源性酶活性失活/脱蛋白和NAD(P)H降解(技术手册中的建议)。为了简化样品处理,提供了与96孔板和384孔板兼容的快速酶失活和NAD(P)H降解方法,不需要样品离心或自旋柱。


优势

快速测量各种样品类型的代谢物:测量介质,细胞,组织和血浆。该分析只需要最少的准备步骤,不需要离心和旋转柱。

行为简单的井下处理对细胞内检测。

测量大范围的浓度:宽线性可达3个对数,可实现简单的样本测量。

检测微小的变化: S/Bmax > 100检测窗口宽,与比色法和荧光法相比,可更好地识别代谢物水平的微小变化。

每个样本获得更多信息:该方法适用于测定来自同一样品的多种代谢物。复配细胞活力测定进行归一化。

SKOV-3细胞分泌谷氨酸

13900 ma-w
SKOV-3卵巢癌细胞被镀于5,000(浅蓝色条)或15,000(深蓝色条)细胞/孔。在指定的时间点对培养基取样,并按照技术手册TM495中的描述进行谷氨酸- glo™检测。

从一个样品中测量多个代谢物

通过取样培养基随时间的变化,容易测量细胞糖酵解和谷氨酰胺水解的变化。直接测量对细胞的能量状态很重要的四种代谢物-葡萄糖,乳酸,谷氨酸和谷氨酸-可以并行使用生物发光葡萄糖- glo™,乳酸- glo™,谷氨酰胺/谷氨酸- glo™和谷氨酸- glo™测定法。不需要专门的仪器、板或人工介质。与所有生物发光代谢物分析兼容的样品处理意味着同一样品可以用于检测所有四种代谢物。这包括样品类型,如培养基,血清,血浆和组织。以下数据是通过使用来自技术手册TM494中描述的相同细胞培养的培养基样品测量代谢物产生的。

13836ma-w-a:用代谢产物多重分析法测定葡萄糖消耗。
13836ma-w-b:乳酸分泌测定代谢产物多重试验。
13836ma-w-c:用代谢物多重试验测定谷氨酰胺的消耗。
13836ma-w-d:代谢物多重试验测定谷氨酸分泌。

进一步的阅读

  1. 周,W。et al。(2014)自焚生物致发光醌荧光素用于NAD(P)H测定和基于还原能力的细胞活力测定年代。化学生物化学15670 - 5。
  2. Vidugiriene, J。.(2014)基于生物发光细胞的NAD(P)/NAD(P)H快速测定二核苷酸和抑制剂筛选分析和药物开发技术“,12, 514 - 26所示。
  3. Leippe D。.(2017)葡萄糖和谷氨酰胺代谢的生物发光试验:细胞外和细胞内代谢物变化的高通量筛选sla发现22(4), 366 - 77。

规范

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还原酶

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还原酶底物

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荧光素检测解决方案

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河畔

J136B 1×275μl

谷氨酸

J139A 1×50μl

谷氨酸脱氢酶

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SDS

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证书的分析

按地段编号查册

使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

储存条件

AA

专利和免责声明

美国帕特。编号9,273,343和9,951,372,欧洲派。2751089号,日本派。6067019号及其他未决专利。

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还原酶底物

G885B 1×275μl

荧光素检测解决方案

J135B 1×50毫升

河畔

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谷氨酸

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谷氨酸脱氢酶

J141B 1×1毫升

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