谷氨酰胺/ Glutamate-Glo™试验

化验是如何工作的

该方法是基于谷氨酰胺酶将谷氨酰胺转化为谷氨酸。接下来，谷氨酸氧化和NADH产生与生物发光NADH检测系统相结合。谷氨酸脱氢酶利用谷氨酸和NAD+合成α-酮戊二酸和NADH。在NADH存在的情况下，原荧光素还原酶底物被还原酶转化为荧光素，然后被Ultra-Glo™重组荧光素酶使用产生光。

该试验需要两个步骤:i)谷氨酰胺酶将谷氨酰胺转化为谷氨酸;用谷氨酸检测试剂进行谷氨酸检测。当以1:1的比例将含有谷氨酸脱氢酶(GlutDH)、NAD+、还原酶、还原酶底物和荧光素酶的谷氨酸检测试剂加入到含有谷氨酸的样品中时，酶偶联反应开始并同时进行。发光信号与谷氨酸的量成正比，并不断增加，直到谷氨酸被消耗殆尽，此时达到稳定的发光信号。

当使用这种方法时，谷氨酰胺和谷氨酸都将被测量。对于谷氨酸没有必要使用单独的化验方法。对于同时含有谷氨酸和谷氨酸的样品，光信号将与总谷氨酸和谷氨酸的起始浓度成正比。因此，需要在没有谷氨酰胺酶的情况下进行第二次反应来测量谷氨酸浓度。谷氨酰胺水平可以通过从总谷氨酰胺加谷氨酸信号中减去谷氨酰胺单一信号来计算。

优势

快速测量各种样品类型的代谢物:测量介质，细胞，组织和血浆。该分析只需要最少的准备步骤，不需要离心和旋转柱。

行为简单的井下处理对细胞内检测。

测量大范围的浓度:宽线性可达3个对数，可实现简单的样本测量。

检测微小的变化: S/Bmax > 300检测窗口宽，与比色法和荧光法相比，可以更好地识别代谢物水平的微小变化。

每个样本获得更多信息:该方法适用于测定来自同一样品的多种代谢物。复配细胞活力测定进行归一化。