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Glycogen-Glo™试验

易,敏感糖原测定试剂盒的生物样品

  • 与细胞裂解液,组织匀浆和培养基样品兼容
  • 检测限:<20ng/ml
  • 支持HTS应用

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Glycogen-Glo™试验
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糖原的敏感井内检测

糖原- glo™检测是一种快速、灵敏的检测生物样品中糖原的方法。该方法允许您从同一孔中制备样品和读取信号,无需额外的细胞收集、离心或旋转柱。基于生物发光技术,糖原glo™检测可以检测糖原合成、储存和分解的细微变化。

糖原- glo™检测是如何工作的

如何用糖原- glo法检测糖原。

糖原- glo™检测利用一系列酶偶联反应。首先,糖原被葡萄糖淀粉酶消化成葡萄糖。然后使用葡萄糖脱氢酶结合生物发光NADH检测技术测量产生的葡萄糖。结果是光信号与样品中的起始糖原浓度成正比。

如何测定糖原浓度

同时含有糖原和葡萄糖的样品需要两个反应来确定糖原浓度。

同时含有糖原和葡萄糖的样品需要两个反应来确定糖原浓度。一个反应用来测量消化的糖原和样品中存在的任何葡萄糖产生的总葡萄糖。第二个用来测量消化前样品中存在的任何葡萄糖。两种反应信号的差异代表样品中糖原的贡献。糖原的有效消化为葡萄糖单体(≥70%)简化了数据解释和计算。

简单检测协议

糖原- glo测定流程。

检测糖原的最小变化

与比色法和荧光法相比,生物荧光检测具有更高的灵敏度,因此需要较少的细胞来确定细胞内糖原水平。

灵敏度

< 1µg / ml

检测限度

< 20 ng / ml

线性范围

至20µg/ml糖原

最大检测窗口(S/B)

> 250

糖原- glo™滴定曲线

数据显示使用糖原- glo法检测糖原的敏感性。

生物发光信号(RLU)与样品的糖原含量成正比,依赖于糖淀粉酶的酶处理。

监测细胞内糖原的消耗和积累

使用糖原- glo测定法监测糖原消耗和积累。

糖原- glo™检测的细胞裂解物的制备很简单,可以在孔内进行。为了为接下来的实验准备裂解物,培养基被移除,细胞在用酸(HCl)裂解前用PBS洗涤三次。细胞在饥饿时消耗糖原。共12,500个细胞在含25mM葡萄糖的培养基或含0mM葡萄糖的饥饿培养基中生长一夜。图b饥饿的细胞在葡萄糖的存在下积累糖原。细胞被饥饿过夜,然后收集,然后在含有0或10mM葡萄糖的培养基中镀膜24小时。

包大小

  • 5ml试剂盒(足够在96孔板中进行100次检测)
  • 50ml试剂盒(足够在96孔板中进行1000次化验)

反应体积可以很容易地扩展到384孔板,用于高通量应用。

美国帕特。编号9,273,343和9,951,372,欧洲派。2751089号,日本派。6067019号及其他未决专利。

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