人类DNA定量

DNA纯化方法不能区分人类DNA和其他DNA(如细菌和真菌DNA)。因此，如果样本不是原始的，而您想要确定存在的人类基因组DNA的浓度，您将需要使用人类特定的DNA定量系统。在法医学中，最常见的系统是基于实时PCR，利用荧光标记的寡核苷酸探针或引物实时检测和定量PCR产物。随着特异性PCR产物的积累，可以通过荧光随时间的变化来监测反应的进展。leyu乐鱼网在PCR的指数阶段，荧光的变化与PCR产物的积累成正比。

PowerQuant™系统是一种采用水解探针技术的五染料四靶点qPCR多重pcr。该系统包括三个多拷贝靶标(常染色体，Y和降解)，一个内部阳性对照(IPC)和一个被动参考，每个在不同的染料通道。常染色体靶点的扩增决定了人类DNA的总浓度，Y扩增决定了提取样本中人类男性DNA的浓度。降解靶点评价DNA降解程度。IPC靶点是扩增反应的内部控制，用来评估是否存在PCR抑制剂。PowerQuant™系统的推荐方案使用了通过对PowerQuant™男性gDNA标准品进行连续稀释而生成的四点标准曲线。使用PowerQuant™系统进行DNA定量，在Applied Biosystems®7500 Real-Time PCR系统上使用热循环协议提供快速结果，大约需要1小时。

Plexor®HY系统是一种实时PCR检测方法，可以在一个反应中同时测定人类总DNA和男性DNA的浓度。该试剂盒包含一个内部PCR对照，用于检测存在PCR抑制剂时可能出现的假阴性结果，以及一个熔融曲线函数，以确认扩增的产物是正确的。Plexor®HY系统在放大过程中测量荧光信号的减少。每个目标的扩增只使用两个引物，其中一个包含荧光标记和修饰的碱基。随着扩增的进行，通过在互补修饰碱基对面结合荧光淬灭剂，荧光减弱。猝灭器靠近位于引物末端的荧光染料，导致荧光信号的减少。PCR后，熔体分析可以为最终的分析设计提供内部控制或加速故障排除。