目标扩增和库前准备
PowerSeq™系统可以添加到您的测序分析工作流程中,以促进文库准备和线粒体控制区的目标扩增。
PowerSeq™CRM嵌套系统通过减少线粒体基因组控制区测序的实际操作时间,为文库准备提供了一个简化的过程。PowerSeq™46GY系统是一个试剂盒中常染色体和Y-STR基因座的最大组合,可生成序列数据并改善您的MPS工作流程。
PowerSeq™定量MS系统是一种基于qpcr的流线型系统,设计用于与Illumina MiSeq®平台兼容的MPS库的精确定量。通过直接测量绑定到适配器序列的DNA, MPS文库量化消除了对人类特异性的需求。
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介绍法医测序应用
大规模并行测序(MPS),也被称为下一代测序(NGS),有可能缓解法医实验室面临的一些最大挑战,即降解的DNA和含有来自多个参与者DNA的样本。与毛细管电泳不同,MPS基因分型方法不需要荧光标记的寡核苷酸来区分大小相似的扩增产物。leyu乐鱼网此外,不需要在一个颜色通道内设计引物来产生不同大小的扩增子,以避免等位基因重叠。因此,所有的扩增子都可以具有相似的小尺寸(通常小于275个碱基对)。小尺寸的扩增子在处理降解的DNA时特别有利。因为等位基因是由重复的数量和DNA序列来区分的,额外的信息可以从样本中得到。这在对混合物进行基因分型时尤为重要。
由于不依赖于尺寸和荧光标签,使用MPS方法可以实现更大的多路复用。除了常染色体短串联重复序列(STRs)外,我们还可以对Y-STRs、单核苷酸多态性(SNPs)和线粒体DNA控制区进行测序。
Illumina测序平台(MiSeq®和MiSeq®FGx)上MPS工作流程的初始步骤与毛细管电泳所用的工作流程几乎相同。从样本中提取DNA,对DNA的数量进行定量,并进行PCR以扩增感兴趣的基因组DNA区域(如STR位点或SNP位点)。有了MPS,扩增子需要经过修饰,以连接DNA测序所必需的适配器。这种修饰可能需要进行第二次扩增,将适配器序列添加到初始扩增子上,或者通过一系列酶促反应将适配器序列连接到扩增子上。无论采用何种方法,过量的引物和引物-二聚体必须通过使用顺磁珠或柱进行尺寸选择来消除。纯化后,扩增子定量和归一化,然后进行测序分析。