免疫测定

免疫测定法是一种基于抗体结合和检测特定抗原的能力的便捷且广泛使用的检测方法。ELISA(酶联免疫吸附测定)和Western blot技术是常用的免疫测定的典型例子。

elisa在多种格式的多孔板中进行。在夹心ELISA中，抗体被结合到平板表面，用于从血浆或血清等样品中捕获目标抗原。彻底清洗后，加入第二种抗体，它与抗原结合，形成抗体-抗原-抗体“三明治”。该第二抗体可以用能够检测的酶底物标记，或者可以用标记的种特异性二抗(例如，抗人IgG)检测。在其他ELISA格式中，目标抗原可以直接结合到板上并用于检测样品中存在的抗体。然后用二级标记抗体检测这些结合抗体。

在酶免疫测定中，连接到检测抗体的酶产生与原始样品中存在的目标抗原的量成比例的颜色信号。根据免疫分析格式，可以使用分光光度计或荧光板阅读器检测和测量颜色的程度。

在Western blotting中，样品中存在的单个蛋白质在凝胶上分离并转移到硝化纤维素膜上，然后用针对特定抗原的标记抗体对其进行询问。洗涤后，结合抗体通过标记的一抗或二抗产生的信号(颜色、荧光或化学发光)显影。

ELISA和Western blot技术具有特异性、敏感性和相对易于使用的优点。然而，它们执行起来很耗时，涉及许多洗涤和孵育步骤。所涉及的步骤数量也可能导致显著的分析到分析的可变性。

Lumit™免疫测定与Western blots和elisa的不同之处在于，它提供了一种免洗、基于生物发光的方法，以快速、敏感的方式检测各种目标分子。Lumit™免疫测定基于NanoLuc®二进制技术(NanoBiT®)。在Lumit™免疫测定中，抗体或抗原分别用NanoBiT®荧光素酶的小亚基和大亚基进行化学标记，分别称为SmBiT和LgBiT。在目标分子存在的情况下，两个亚基被带到近距离，使SmBiT和LgBiT形成一个活性酶并产生明亮的发光信号，使用微孔板读取器检测。