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Secreted NanoLuc®基因报告载体

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在哺乳动物细胞中表达分泌报告蛋白的载体

  • NanoLuc®荧光素酶报告修饰的分泌序列用于细胞外表达
  • 选择不同的启动子选项克隆一个假定的调控元件或用作对照报告载体
  • 一个载体提供了湿霉素的稳定表达选择

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Secreted NanoLuc®基因报告载体
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pNL1.3 [secNluc], pNL3.3 [secNluc/ minP], pNL2.3 [secNluc/Hygro]和pNL1.3.CMV[secNluc载体在哺乳动物细胞中以各种启动子驱动或无启动子配置提供分泌的小型荧光素酶报告子。其中一种无启动子载体携带潮霉素抗性基因,在细胞中稳定表达。

另外一个分泌的NanoLuc®荧光素酶选项,pNLF1-secN [CMV/Hygro] Vector,可以在pNLF1 NanoLuc®Protein Fusion Vectors产品页面

NanoLuc®(Nluc)荧光素酶是一种小酶(19.1kDa),用于作为发光报告剂的最佳性能。这种酶比任何一种萤火虫都要亮100倍(Photinus pyralis)或Renilla reniformis荧光素酶利用一种新型底物呋喃嗪,产生高强度、发光型发光。该发光反应不依赖于atp,旨在抑制背景发光以获得最大的检测灵敏度。

应用程序
  • 转录调控。
  • Virus-cell交互。
  • 化合物筛选。
  • 转录后修饰。
  • GPCR信号。
  • 细胞信号传导。
  • 启动子分析。

关于NanoLuc®荧光素酶和pNL载体

作为遗传报告,多种形式的NanoLuc®荧光素酶已被配置以满足不同的实验目标。未融合的Nluc提供最大的光输出和灵敏度,NanoLuc®-PEST (NlucP)紧密耦合蛋白表达与转录活性的变化和增加的信号-背景比。当分泌报告基因被首选时,NanoLuc®荧光素酶融合到n端分泌信号(secNluc)。在1000000倍浓度范围内,发光与NanoLuc®蛋白的量成线性比例,当用Nano-Glo®荧光素酶检测试剂检测时,信号半衰期≥2小时。

NanoLuc®荧光素酶具有许多物理特性,使其成为一种优秀的报告蛋白:

  • 非常小的单体酶(171个氨基酸;513个基点)
  • 热稳定性高(T= 60°C)
  • 在较宽的pH范围内(pH 6-8)有效
  • 没有翻译后修饰或二硫键
  • 细胞内均匀分布
  • 发射光谱非常适合生物发光共振能量转移(BRET;λmax = 465nM)。

NanoLuc®荧光素酶可用于多种质粒,用于转录控制的报告基因分析,以及每种NanoLuc®形式(未融合的Nluc, PEST不稳定的NlucP和分泌的secNluc)。不同的pNL变体是为以下目的设计的:

  • pNL1:克隆一个已知或假定的启动子区域
  • pNL2:克隆已知或假定的启动子区域,并通过湿霉素选择建立稳定的细胞系
  • pNL3:克隆不需要基本启动子的结合位点或响应元件(如存在于pNL3.2中)。NF -κB-RE向量)
  • 对于未融合的,pest不稳定的和分泌的Nluc形式的控制质粒也是可用的。

pNL载体系列使用基于pgl4的主干,便于从现有质粒转移序列。这种主干设计还通过去除许多转录因子结合位点和其他潜在的调控元件来减少异常结果。Nluc基因变体经过密码子优化,并去除了许多潜在的调控元件或其他不良特征(如常见的限制性内切酶位点)。

报告基因分析使用secNluc。

报告基因分析使用secNluc。
报告基因分析使用secNluc。
10323 ma-w

pNL1.3 [secNlucVector GenBank®登录号JQ437372和向量序列文本文件

10329 ma-w

pNL2.3 [secNlucVector GenBank®登录号JQ513380和向量序列文本文件

10326 ma-w

pNL3.3 [secNluc/minP] Vector GenBank®登录号JQ513371和向量序列文本文件

10331 ma-w

pNL1.3.CMV [secNluc/CMV] Vector GenBank®登录号JQ513378和向量序列文本文件

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研究人员只能将本产品用于研究用途;本产品不得转让或用于商业用途。商业用途是指一方为换取对价而对本产品或衍生品的任何和所有使用,包括但不限于(1)用于进一步的产品制造;(二)用于提供服务、信息或者数据;(3)转售该产品或其衍生品,无论该产品或衍生品是否转售用于研究。研究人员无权修改或以其他方式制造荧光素酶基因核苷酸序列的变体,除非研究人员可以(1)制造融合基因序列,条件是所得到的荧光素酶基因的编码序列与完整的荧光素酶基因序列相比,受影响的末端缺失的脱氧核苷酸不超过4个;(2)基于编码荧光素酶的失活或发光重建,在剪接研究中leyu体育靠谱吗插入和移除核酸序列。未经Promega事先明确书面同意,不得授权对本产品或衍生产品进行其他用途。

此外,研究人员必须:
(1a)使用Nano-Glo®品牌发光检测试剂(LARs)对本产品及其衍生物的发光活性进行所有测定;或
(1b)与Promega联系,以获得使用该产品及其衍生产品的许可,并使用非Promega制造的LARs。

对于将Nano-Glo®品牌LARs用于将能量转移(如生物发光共振能量转移)到基因编码的自身荧光蛋白以外的受体,研究人员必须:
(2a)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对该产品及其衍生物的能量转移活性进行所有测定;或
(2b)联系Promega以获得使用该产品及其衍生物向非Promega制造的能量受体进行能量转移分析的许可证。

研究人员可以将衍生品转让给他人用于研究,前提是转让时将本标签许可的副本提供给接收者,并且接收者同意受本标签许可条款的约束。关于本标签许可之外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请与Promega联系以获取供应和许可信息。Promega不就产品作出任何形式的明示或暗示的陈述或保证,包括适销性或适用于特定目的。本协议条款受美国威斯康辛州法律管辖。

美国帕特。编号8,557,970、8,669,103、9,777,311、9,840,730、9,951,373和10,633,690;欧洲的帕特。编号2456864、2635595、3181687及3409764;日本的帕特。编号6038649、6155424、6227615及6374420;以及其他专利和未决专利。

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美国帕特。编号8,557,970、8,669,103、9,777,311、9,840,730、9,951,373和10,633,690;欧洲的帕特。编号2456864、2635595、3181687及3409764;日本的帕特。编号6038649、6155424、6227615及6374420;以及其他专利和未决专利。

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美国帕特。编号8,557,970、8,669,103、9,777,311、9,840,730、9,951,373和10,633,690;欧洲的帕特。编号2456864、2635595、3181687及3409764;日本的帕特。编号6038649、6155424、6227615及6374420;以及其他专利和未决专利。

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