记者化验

报告分析提供了一种容易测量生物反应的方法。有许多报告基因，如碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，荧光蛋白和荧光素酶。荧光素酶用于创建生物发光报告分析，具有高度定量，在广泛的动态范围内敏感，并易于通过测量光输出检测。有许多不同的生物发光类，都是基于酶荧光素酶与发光底物的相互作用产生光。在基因报告应用中使用最广泛的荧光素酶是甲虫荧光素酶(包括萤火虫荧光素酶)，Renilla荧光素酶和改良的深海虾荧光素酶(NanoLuc®荧光素酶)。

为了创建荧光素酶报告试验，荧光素酶遗传报告被引入细胞使用方法，如瞬时或稳定转染。细胞内荧光素酶通常通过添加含有洗涤剂的缓冲溶液溶解细胞和荧光素酶底物来启动发光反应来定量。每个样品可以定量10-20摩尔或更少的荧光素酶。这相当于每个细胞大约有10个分子，使荧光素酶测定具有广泛的线性动态定量范围。荧光素酶的分泌形式可以通过对培养基取样并在单独的培养皿中进行荧光素酶测定来测量。一些细胞内荧光素酶，如NanoLuc®和Renilla荧光素酶，可以在没有细胞裂解的情况下检测，以创建活细胞报告分析，测量细胞反应的动力学。

大多数报告基因检测涉及一个或两个报告基因。大多数情况下，第二个报告器由“控制”向量表示，以规范化实验报告器的结果。例如，第二个报告器可以控制细胞数量或转染效率的变化。通常，对照报告基因由组成型启动子驱动，控制载体与“实验”载体共转染。不同的报告基因用于控制和实验载体，以便两个报告产物的相对活性可以单独测定。leyu乐鱼网参观报告分析选择指南有关如何根据您的需要选择最佳报告试验的更多信息。