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Nano-Glo®Endurazine™和Vivazine™活细胞基质

活细胞检测NanoLuc®或NanoBiT®报告活性数小时或数天

  • 增加信号稳定性,用于报告活动的扩展实时动力学分析
  • 通过测量同一样本随时间变化的反应来简化时间过程研究
  • 在内源性水平测量蛋白质的敏感性-不需要过度表达

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Nano-Glo®Endurazine™和Vivazine™活细胞基质
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纳米glo活细胞检测概述

活细胞,非溶性分析使用纳米glo®活细胞检测系统由于信号衰减,限制在≤2小时内。Nano-Glo®Endurazine™和Vivazine™活细胞底物为NanoLuc®和NanoBiT®荧光素酶提供了可选的活细胞检测方法,使非裂解检测持续数小时到数天。对于这两种底物,缓慢的酯水解速率导致整个实验过程中呋喃嗪的稳定释放,这一过程是由细胞酯酶催化的。一旦形成,呋喃咪嗪可作为NanoLuc®和NanoBiT®荧光素酶的底物。

与Endurazine™衬底相比,Vivazine™衬底通常显示出更高的亮度,但也有更高的信号衰减率。与其他Nano-Glo®活细胞基质相比,Endurazine™基质将提供最大的信号稳定性,但初始信号强度较低。评估两种基质,以确定哪种信号强度和稳定性的组合最适合您的实验[例如,纳米glo®扩展活细胞基质试验包(Cat。# N2590)]。

选择信号强度和稳定性的最佳组合

纳米glo活细胞检测与Endurazine和Vivazine底物的比较。
比较Nano-Glo®Endurazine™和vivine™底物与Nano-Glo®活细胞检测系统。PGK启动子表达的NanoLuc®荧光素酶质粒瞬时转染HEK293细胞,测量发光信号强度。

数天的分析报告活动

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比较Nano-Glo®Endurazine™和Vivazine™72小时内的信号。从HSV-TK启动子中表达的NanoLuc®荧光素酶质粒瞬时转染HEK293细胞,测量72小时的发光信号强度。

测量内源性调控的hibit标记蛋白的实时丰度


Endurazine™和Vivazine™底物可用于监测表达LgBiT的细胞中HiBiT标记蛋白的实时表达水平,其中HiBiT与LgBiT结合形成NanoBiT®荧光素酶。HiBiT标签可以通过CRISPR-Cas9基因编辑引入,并在内源性表达条件下测定蛋白质水平,通过简单的生物发光读出实时跟踪同一样本的细胞蛋白质丰度。Endurazine™和Vivazine™底物的配制可降低自发光背景,以在低表达水平下获得最大的检测灵敏度。

动态监测内源性BRD4水平

使用Endurazine和Vivazine活细胞基质实时监测HiBiT-BRD4融合表达。
通过CRISPR-Cas9对稳定表达LgBiT的HEK293细胞进行修饰,在内源性BRD4位点上生成表达HiBiT-BRD4融合的细胞。在使用ARV-771(一种brd4靶向蛋白降解剂(PROTAC)治疗后,使用Endurazine™和Vivazine™底物实时监测HiBiT-BRD4融合表达水平。

量化NanoLuc®转录报告活性的时间响应

Endurazine™和Vivazine™底物可与失稳定的NanoLuc®报告基因(NanoLuc- pest, NlucP)一起用于活细胞试验,研究来自同一样本的转录反应随时间的动态变化。

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HEK293细胞瞬时转染表达NlucP的启动子和cAMP反应元件(CRE)。在时间零点时将Endurazine™和Vivazine™底物添加到细胞中,并在37°C下使用GloMax®Discover仪器连续测量发光。大约2小时后,加入不同浓度的forskolin,通过增加细胞内cAMP浓度诱导NlucP的表达。面板。使用Endurazine™衬底的10小时时间疗程。面板B。使用Vivazine™衬底的10小时时间课程。面板C。对面板A中的数据进行逐井归一化。面板D。面板b中数据的每井归一化,两种底物均检测到随着cAMP水平的增加,CRE报告活性呈剂量依赖性增加。Vivazine™衬底提供更高的整体信号。

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通过使用本产品,研究者同意受此有限使用标签许可条款的约束。如果研究人员不愿意接受本标签许可的条款,且产品是未使用的,Promega将接受未使用的产品的退货,并为研究人员提供全额退款。

研究人员只能将本产品用于研究用途;请勿作商业用途。商业使用是指一方为换取对价而对本产品的任何和所有使用,包括但不限于(1)用于进一步的产品制造;(2)在提供服务、信息或数据时使用;以及(3)产品的转售,无论该产品是否转售用于研究。研究者无权修改或以其他方式创造产品的变体。未经Promega事先明确的书面同意,不得擅自使用或转让本产品。

对于将Nano-Glo®品牌试剂用于向基因编码的自荧光蛋白以外的受体进行能量转移(如生物发光共振能量转移),研究人员必须:
(i)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对该产品的所有能量转移活性进行测定;或
(ii)联系Promega获得使用该产品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega对产品不作任何明示或默示的陈述或保证,包括关于适销性或适合某一特定用途的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

美国帕特。第10,836,767号及其他未决专利。

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对于将Nano-Glo®品牌试剂用于向基因编码的自荧光蛋白以外的受体进行能量转移(如生物发光共振能量转移),研究人员必须:
(i)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对该产品的所有能量转移活性进行测定;或
(ii)联系Promega获得使用该产品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega对产品不作任何明示或默示的陈述或保证,包括关于适销性或适合某一特定用途的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

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亚历山德罗

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