测序级修饰胰蛋白酶

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，专门裂解赖氨酸和精氨酸残基的羧基侧。胰蛋白酶的严格特异性对蛋白质鉴定至关重要。原生胰蛋白酶受自溶作用，产生假胰蛋白酶，其表现出扩宽的特异性，包括凝乳胰蛋白酶样活性。这种自溶产物存在于胰蛋白酶制剂leyu乐鱼网中，会导致额外的肽片段，可能会干扰质谱检测到的片段质量的数据库分析。测序级胰蛋白酶的制造提供了最大的特异性。猪胰蛋白酶中的赖氨酸残基已通过还原甲基化修饰，产生了一种高度活性和稳定的分子，对自溶消化具有极强的抵抗力。

经TPCK处理后，纯化胰蛋白酶的特异性进一步提高，使糜蛋白酶失活。然后用亲和层析纯化胰酶并进行冻干。它能抵抗0.1% SDS, 1M尿素或10%乙腈等温和变性条件，并在2M胍HCl中保留50%的活性。当酸性残基存在于敏感键的两侧时，胰蛋白酶的活性会降低。如果脯氨酸位于赖氨酸或精氨酸的羧基侧，则该键几乎完全不能裂解。

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推荐的反应缓冲液:50 mm NH₄HCO_3.(pH值7.8)。

1. Keil-Dlouha,教授et al。(1971)2月的信16291 - 5。
2. 大米、相对湿度et al。(1977)物化学。Biophys。学报492, 316 - 21所示。