PCR克隆
t载体克隆，或称TA克隆，是一种方便的克隆PCR产物的方法leyu乐鱼网TaqDNA聚合酶。pGEM®-T载体是一般PCR克隆的常用选择。这些载体可以用于连接反应;用限制性内切酶切割，产生钝端，并在两端添加3´末端胸苷激酶(T)。插入位点的3´t悬垂通过防止载体的再循环，并为具有5’a悬垂的PCR产物提供兼容悬垂，极大地提高了PCR产物与质粒的连接效率。leyu乐鱼网pGEM®-T Easy Vector系统包含有胜任的细胞。
pTARGET™载体用于克隆和表达PCR产物在哺乳动物细胞。leyu乐鱼网然后，为测序插入克隆到该载体，pTargeT™测序引物是可用的。
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PCR克隆概述
使用缺乏leyu乐鱼网3 '到5 '外切酶活性的非校对DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)生成的PCR产物，在扩增片段的3 '端留下一个独立于模板的核苷酸脱氧腺苷(a)。这种单核苷酸悬垂允许与具有互补的3´单脱氧胸腺嘧啶(T)悬垂的载体杂交和克隆。
T载体是线性化的质粒，经过处理添加T悬垂以匹配PCR产物的A悬垂。含有A悬垂的PCR片段可以直接连接到这些t尾质粒载体上，除了T4 DNA连接酶的作用外，不需要进一步的酶处理。
高拷贝数的pGEM®-T和pGEM®-T Easy Vectors包含T7和SP6 RNA聚合酶启动子，位于ß-半乳糖苷酶a肽编码区内的多重克隆区两侧，允许对重组克隆进行蓝/白选择。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy Vectors在多个克隆区域内都包含大量的限制性位点。pGEM®-T Easy Vector多重克隆区两侧是限制性内切酶EcoRI、BstZI和NotI的识别位点，为插入物的释放提供三种单酶消化。pGEM®-T载体克隆区两侧是酶BstZI的识别位点。或者，可以使用双重消化法将插入物从任何载体中释放出来。
