qPCR和RT-qPCR

实时定量PCR (Real-time quantitative PCR，简称qPCR)是检测和定量特定目标序列或定量样本中基因表达水平的标准方法。在qPCR中，荧光标记的探针或核酸，或荧光双链dna结合染料加入到PCR反应中，并leyu体育靠谱吗在每个PCR周期后实时监测产物形成。

基于探针的qPCR使用荧光引物或探针来检测扩增产物。这种方法的一个优点是，它允许对目标进行序列特异性检测，并降低了检测非特异性工件的可能性。基于探针的检测也可以通过使用差异标记探针来适应多路放大。基于探针的qPCR检测有几种不同的方法，包括水解探针(如TaqMan®)、杂交探针、发夹探针和标记引物。

使用荧光dna结合染料，如BRYT®Green或SYBR®Green，是最直接的qPCR方法之一。将染料添加到反应中，并在每个PCR循环中测量荧光。由于这些染料的荧光在双链DNA存在时显著增加，DNA合成可以作为荧光信号的增加进行监测。

实时PCR实验的主要输出是一个扩增曲线，显示作为荧光信号的扩增产物的积累与周期数的关系。

量化起始物质的量是使用量化循环(Cq，也称为Ct)来完成的。Cq或Ct(阈值周期)是在特定井中检测到的荧光信号达到放大阈值的放大周期。放大阈值是根据组中所有曲线基线区域上的背景荧光计算的，表示报告信号显著高于背景水平的点。Cq与反应中起始模板的数量成反比，是PCR反应中靶标浓度的相对度量。