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LgBiT表达载体和稳定细胞系

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表达细胞内LgBiT蛋白用于HiBiT分析

  • 对hibit标记蛋白进行活细胞动力学分析;不需要细胞裂解
  • 与外源或内源表达的HiBiT融合蛋白兼容
  • 使用补充HiBiT作为活细胞NanoBRET™应用的能量供体

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LgBiT表达载体和稳定细胞系
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研究内源性表达条件下的蛋白质动力学

HEK293 LgBiT细胞系和LgBiT表达载体是LgBiT蛋白的细胞内组成表达试剂,该蛋白与11-氨基酸HiBiT标签具有高亲和力的相互作用,以重建NanoBiT®酶。这些细胞内LgBiT表达工具可以与通过CRISPR-Cas9插入瞬时、稳定或内源性表达的HiBiT标记蛋白配对,用于在不裂解细胞的情况下对HiBiT蛋白水平进行终点或动态实时监测。一旦HiBiT被表达,NanoBiT®酶活性被检测纳米glo®活细胞基质它提供了平衡亮度和信号稳定性的选项。

细胞内LgBiT表达将HiBiT标签的使用扩展到活细胞应用,如在疾病模型中测量实时蛋白质动态,或在用靶向蛋白降解物处理细胞后,开发病毒感染模型或检测来监测细胞内多肽或小分子的传递,并在NanoBRET™相互作用分析中使用HiBiT标记的蛋白质作为能量供体。

测量内源性调控的hibit标记蛋白的实时丰度

通过添加单一试剂和简单测量生物发光随时间的变化,对同一样品进行定量时间过程研究。不需要收集多个样本,猜测要测量的端点,或针对目标蛋白质开发抗体。有几种选择可以将细胞内LgBiT合并到您的CRISPR-Cas9 HiBiT敲入工作流程中:

  • 使用HEK293 LgBiT细胞系创建hibit敲入细胞池或克隆。其他LgBiT稳定细胞株也可通过Promega定制化验服务。
  • 使用LgBiT表达向量创建一个稳定的LgBiT细胞系,并进一步编辑细胞系以敲入HiBiT。
  • 编辑HiBiT到你选择的细胞系的内源性位点,并创建一个稳定的细胞系。转染LgBiT表达载体创建稳定的LgBiT表达变体或瞬时表达LgBiT蛋白。

PROTAC治疗后内源性HiBiT-BRD4的活细胞动力学监测

HEK293 LgBiT细胞系CRISPR-Cas9被编辑敲入HiBiT
用CRISPR敲入HiBiT-BRD4融合实时监测HEK293 LgBiT稳定细胞系
利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对HEK293 LgBiT稳定细胞系进行修饰,在内源性BRD4位点构建表达HiBiT-BRD4融合的稳定细胞系。在使用靶向brd4的蛋白质降解物ARV-771处理后,使用Endurazine™和Vivazine™底物实时监测hibitbrd4融合蛋白的表达水平。
HiBiT敲入HEK293细胞后的瞬时LgBiT表达
利用LgBiT表达载体实时监测内源性表达HiBiT-BRD4
首先使用CRISPR-Cas9基因编辑对亲本HEK293细胞系进行修饰,在内源性BRD4位点上创建一个表达HiBiT-BRD4融合的稳定细胞系。在电镀前用LgBiT表达载体转染细胞。在使用brd4靶向蛋白降解物MZ1处理后,使用Endurazine™底物实时监测HiBiT-BRD4融合蛋白的表达水平。

在NanoBRET™应用中使用补充HiBiT作为能量捐赠者,以获得更多的检测可能性

细胞内LgBiT表达试剂允许hibit标记的蛋白质用作活细胞NanoBRET™试验中的生物发光能量供体,用于蛋白质相互作用或小分子靶点接触的研究。NanoBRET是一种基于邻近性的方法,依赖于从生物发光能量供体蛋白质到荧光受体的能量转移。活细胞HiBiT互补产生生物发光供体,它可以与不同的荧光受体偶联,创建与HiBiT标记蛋白的活细胞相互作用测定。

内源性表达HiBiT-BRD4的泛素化动力学
实时测量内源性HiBiT-BRD4融合的泛素化。

使用CRISPR-Cas9基因编辑技术对HEK293 LgBiT稳定细胞系进行修饰,在内源性BRD4位点创建表达HiBiT-BRD4融合的细胞。通过瞬时转染HaloTag®-泛素融合载体,在使用各种PROTAC化合物处理后监测BRD4泛素化水平。使用NanoBRET™Nano-Glo®动力学检测系统测量从生物发光BRD4供体到HaloTag®-泛素荧光受体的能量转移。

LgBiT Expression Vector信息

LgBiT表达式向量映射

LgBiT表达载体序列的文本文件

规范

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LgBiT表达载体

N268A 1×20μg 1μg /μl

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使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

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BB

专利和免责声明

通过使用本产品,研究者同意受此有限使用标签许可条款的约束。如果研究人员不愿意接受本标签许可的条款,且产品是未使用的,Promega将接受未使用的产品的退货,并为研究人员提供全额退款。

本产品不允许转让。研究人员可以在自己的研究中使用本产品,也可以将衍生品转让给他人用于研究用途,前提是在转让时将本标签许可的副本提供给接受者,且接受者同意受本标签许可条款的约束。

研究人员无权修改或以其他方式创建NanoBiT®技术亚基的核苷酸序列变体,但研究人员可以在NanoBiT®技术亚基的末端创建融合基因序列。未经Promega事先明确书面同意,不得授权使用本产品或其衍生产品。

此外,研究人员必须:
(1a)使用Nano-Glo®品牌发光检测试剂(LARs)对本产品及其衍生物的所有发光活性进行测定,或
(1b)联系Promega获得使用非Promega制造的LARs的产品及其衍生产品的许可。

对于将Nano-Glo®品牌LARs用于将能量转移(如生物发光共振能量转移)到基因编码的自荧光蛋白以外的受体,研究人员必须:
(2a)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对本产品及其衍生物的所有能量转移活性进行测定,或
(2b)联系Promega获得使用该产品及其衍生品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

研究人员无权修改、衍生、基因工程或以其他方式创建NanoBiT®控制载体的变体,但研究人员可以传播和存储NanoBiT®控制载体以用于NanoBiT®检测。关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega对产品不作任何明示或默示的陈述或保证,包括关于适销性或适合某一特定用途的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

美国帕特。第9,797,889号专利和其他未决专利。

规范

你正在查看: N2672 改变配置

盒子里是什么?

部分# 大小

HEK293 LgBiT稳定细胞系

N267A 2×1毫升

SDS

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证书的分析

按地段编号查册

使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

储存条件

XX

专利和免责声明

LgBiT稳定细胞系有限使用标签许可证

通过使用本产品,研究者同意受此有限使用标签许可条款的约束。如果研究人员不愿意接受本标签许可的条款,且产品是未使用的,Promega将接受未使用的产品的退货,并为研究人员提供全额退款。

研究者只能将本产品用于研究用途,这可能包括a)药物发现和开发;b)修改、衍生、基因工程或以其他方式创造产品变体(“衍生物”)的权利。本产品不得转让;但是,研究者可以将衍生品转让给他人,前提是在转让时将本标签许可的副本给接受者,并且接受者同意受本标签许可条款的约束。不得将本产品或衍生品用于商业用途。商业使用是指一方为换取对价而对本产品或衍生品的任何和所有使用,包括但不限于(1)用于进一步的产品制造;(2)在提供服务、信息或数据时使用;(3)转售产品或其衍生品,不论该产品或衍生品是否为研究用途而转售。研究人员无权修改或以其他方式创建NanoBiT®技术亚基核苷酸序列的变体。

此外,研究人员必须:
(1a)使用Nano-Glo®品牌发光检测试剂(LARs)对本产品、复制品或其衍生物的发光活性进行所有测定;或
(1b)联系Promega获取使用非Promega制造的产品、副本或带有LARs的衍生品的许可。

对于将Nano-Glo®品牌LARs用于将能量转移(如生物发光共振能量转移)到基因编码的自荧光蛋白以外的受体,研究人员必须:
(2a)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对本产品、副本或其衍生物的所有能量转移活性进行测定;或
(2b)联系Promega获得使用该产品、副本或衍生品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega不就产品的适销性或适合某一特定用途作出任何明示或暗示的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

HEK293细胞是在AdVec公司的许可下获得的。

让我们来寻找符合您需求的产品。

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