无细胞蛋白表达
在翻译系统中使用mRNA模板,或在偶联转录和翻译系统中使用DNA模板(质粒DNA或PCR片段),无需使用整个原核或真核细胞,即可在短短几小时内完成无细胞蛋白表达。对于基于dna的细胞无表达,Promega的耦合转录和翻译(TNT®)系统通过在单一管格式中耦合这些过程,为研究人员提供了节省时间的真核生物体外转录和翻译替代方案。
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什么是无细胞表达系统?
无细胞表达系统为无需细胞本身的蛋白质生产提供了工具。这些工具包括翻译所需的大分子成分,如核糖体、trna、氨基酰基trna合成酶、起始、延伸和终止因子。无细胞表达法是将表型(表达蛋白的功能)与基因型联系起来的最快方法。此外,无细胞蛋白表达系统对于毒性蛋白、膜蛋白、病毒蛋白的表达以及被细胞内蛋白酶快速水解的蛋白的表达都是必不可少的。最流行的真核翻译系统来源于兔网状细胞裂解物(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)。
无细胞表达系统的两种主要形式是基于mrna的翻译系统和基于dna的原核和真核来源的偶联转录和翻译系统。无细胞mRNA翻译系统用于体外转录的mRNA或从组织或细胞中分离的mRNA的蛋白表达。这些系统用于表达单蛋白和多蛋白在高通量应用中,如显示技术。细胞自由翻译系统对RNA的功能和结构分析也很有用,或者对翻译机制的研究也很有用。无细胞DNA翻译系统被用于低通量到高通量的功能基因组和蛋白质组分析的各种应用。