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NanoBiT®PPI启动系统

活细胞中蛋白质相互作用的灵敏检测

  • 检测低表达水平的相互作用,并允许实时动力学分析活细胞
  • 可逆蛋白质互补报告器分析蛋白质缔合和分离
  • 改进的灵敏度和准确性超过分裂萤火虫荧光素酶

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NanoBiT®PPI启动系统
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反映自然细胞生物学的蛋白质相互作用分析

NanoLuc®二元技术(NanoBiT)是一种结构互补报告系统,由一个大BiT (LgBiT;18kDa)亚基和一个小的互补肽。对于蛋白质:蛋白质相互作用的研究,互补肽是Small BiT (SmBiT;11个氨基酸肽),经过优化,使其对LgBiT具有低亲和力。LgBiT和SmBiT亚基作为目标蛋白的融合表达并在细胞中表达。当两种蛋白质相互作用时,亚基聚集在一起形成活性酶,并在底物存在时产生明亮的发光信号。

NanoBiT®互补伙伴的小尺寸最大限度地减少了对正常蛋白质功能的干扰,明亮的信号适应低的原生表达水平。结合活细胞检测的NanoBiT®亚基的低自亲和力提供了蛋白质相互作用动态的动态实时分析。

利用纳米比特技术研究药物效力和结合动力学

研究药物效力和结合动力学

信号与活性的比例和基于平板的格式使NanoBiT非常适合用于PPI研究,包括高通量筛选。

“NanoBiT可以揭示诱导蛋白相互作用的药物效力和药物作用的结合动力学”

你可以在论文中阅读NanoBiT技术背后的技术细节,并回顾蛋白质相互作用分析的示例数据:NanoLuc互补报告器用于精确测量细胞内蛋白质相互作用,迪克森.,(2016)ACS化学。医学杂志11, 400 - 408。


看报纸

用动态、可逆测定法监测蛋白质相互作用的诱导和抑制

与许多分裂系统相比,LgBiT:SmBiT相互作用是可逆的,允许检测快速分离的蛋白质。使用Nano-Glo®活细胞试剂可以实时跟踪活细胞中的PPI动态,这是一种含有细胞渗透性呋喃咪嗪底物的非溶性检测试剂。与分裂系统相比,其优点包括更好的灵敏度、可逆性、能够对多肽或结构稳定的小蛋白质结构域进行融合,以及能够实时测量蛋白质相互作用。

这张海报利用纳米比特二元技术监测细胞内蛋白质相互作用提供更多详细信息,包括说明这些功能的数据。

下载的海报
用NanoBiT监测细胞内的实时PPI动态
用NanoBiT实时监测蛋白质动态

实时监测蛋白质动态

在本实验中,HeLa细胞转染FKBP-SmBiT和FRB-LgBiT融合结构。孵育一夜后,加入底物,样品在LV200显微镜上成像。基线读取约30秒后,加入500nM雷帕霉素诱导FKBP:FRB相互作用并记录图像(成像周期为0.5秒)。

NanoBiT示例应用程序

纳米比特粉笔语在爪蟾胚胎中的翻译抑制
低亲和力互补伙伴的重要性粉笔对话
用NanoBiT研究线粒体裂变的粉笔对话

NanoBiT®系统向量

NanoBiT®PPI启动器系统提供了创建LgBiT和SmBiT蛋白融合所需的载体,以及控制载体和Nano-Glo®活细胞检测系统,这是一种单添加的非溶解检测试剂,用于监测活细胞中的NanoBiT®发光。参见下面每个系统提供的矢量的详细信息。
NanoBiT®PPI MCS启动器系统矢量,Cat。# N2014

使用NanoBiT®MCS启动器系统,您可以使用传统的多克隆位点(MCS)克隆产生感兴趣的蛋白质的N端和c端LgBiT和SmBiT融合。表达由HSV-TK启动子驱动,在哺乳动物细胞中提供构成性的低水平表达。

13374 ma-w
pBiT1.1-N [TK / LgBiT]向量序列的文本文件
13373 ma-w
pBiT2.1-C [TK / SmBiT]向量序列的文本文件
13369 ma-w
SmBiT-PRKACA控制向量序列的文本文件
13372 ma-w
pBiT1.1-C [TK / LgBiT]向量序列的文本文件
13367 ma-w
NanoBiT®负控制向量序列的文本文件
13375 ma-w
pBiT2.1-N [TK / SmBiT]向量序列的文本文件
13368 ma-w
LgBiT-PRKAR2A控制向量序列的文本文件
NanoBiT®PPI flexxi®启动器系统矢量,Cat。# N2015

NanoBiT®Flexi®启动器系统,允许您使用Flexi®矢量克隆系统生成N端和c端LgBiT和SmBiT融合,这是一种基于罕见切割限制性内切酶SgfI和PmeI的定向克隆方法,提供了一种快速、高效和高保真的方式在Flexi®矢量之间转移蛋白质编码区域,而不需要重新测序。的Find My Gene™服务包含许多ORF克隆已经在Flexi®格式的简单创建融合。

13370 ma-w
pFN33K lgbtk -neo flexxi®Vector序列的文本文件
13364 ma-w
pFC36K SmBiT TK-Neo flexxi®Vector序列的文本文件
13363 ma-w
pFC34K LgBiT TK-Neo flexxi®Vector序列的文本文件
13367 ma-w
NanoBiT®负控制向量序列的文本文件
13371 ma-w
pFN35K SmBiT TK-neo flexxi®Vector序列的文本文件
13368 ma-w
LgBiT-PRKAR2A控制向量序列的文本文件
13369 ma-w
SmBiT-PRKACA控制向量序列的文本文件
pF4A CMV柔性矢量。
pF4A CMV flexxi®矢量登录号AY753580序列的文本文件
NanoBiT®PPI控制对(FKPB, FRB), Cat。# N2016

NanoBiT®PPI控制对(FKBP:FRB;猫。# N2016)可单独作为诱导阳性对照。

13365 ma-w
FRB-LgBiT控制向量序列的文本文件
13366 ma-w
FKBP-SmBiT控制向量序列的文本文件
额外的NanoBiT®载体和分析
替代cmv为基础的启动系统兼容稳定的细胞系生成、额外的控制选项、β抑制素募集载体和针对热门靶点(如KRAS和EGFR)的优化分析。

规范

你正在查看: N2014 改变配置

盒子里是什么?

部分# 大小

pBiT1.1-C [TK / LgBiT]向量

N196A 1×20μg

pBiT2.1-C [TK / SmBiT]向量

N197A 1×20μg

pBiT1.1-N [TK / LgBiT]向量

N198A 1×20μg

pBiT2.1-N [TK / SmBiT]向量

N199A 1×20μg

NanoBiT®负控制向量

N202A 1×20μg

LgBiT-PRKAR2A控制向量

N203A 1×20μg

SmBiT-PRKACA控制向量

N204A 1×20μg

纳米glo®活细胞基板

N205A 2×125μl

纳米glo®LCS稀释缓冲液

N206A 2×2.5毫升

SDS

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证书的分析

按地段编号查册

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仅供研究用途。不用于诊断程序。

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通过使用本产品,研究者同意受此有限使用标签许可条款的约束。如果研究人员不愿意接受本标签许可的条款,且产品是未使用的,Promega将接受未使用的产品的退货,并为研究人员提供全额退款。

本产品不允许转让。研究人员可以在自己的研究中使用本产品,也可以将衍生品转让给他人用于研究用途,前提是在转让时将本标签许可的副本提供给接受者,且接受者同意受本标签许可条款的约束。

研究人员无权修改或以其他方式创建NanoBiT®技术亚基的核苷酸序列变体,但研究人员可以在NanoBiT®技术亚基的末端创建融合基因序列。未经Promega事先明确书面同意,不得授权使用本产品或其衍生产品。

此外,研究人员必须:
(1a)使用Nano-Glo®品牌发光检测试剂(LARs)对本产品及其衍生物的所有发光活性进行测定,或
(1b)联系Promega获得使用非Promega制造的LARs的产品及其衍生产品的许可。

对于将Nano-Glo®品牌LARs用于将能量转移(如生物发光共振能量转移)到基因编码的自荧光蛋白以外的受体,研究人员必须:
(2a)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对本产品及其衍生物的所有能量转移活性进行测定,或
(2b)联系Promega获得使用该产品及其衍生品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

研究人员无权修改、衍生、基因工程或以其他方式创建NanoBiT®控制载体的变体,但研究人员可以传播和存储NanoBiT®控制载体以用于NanoBiT®检测。关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega对产品不作任何明示或默示的陈述或保证,包括关于适销性或适合某一特定用途的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

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研究人员只能将本产品用于研究用途;请勿作商业用途。商业使用是指一方为换取对价而对本产品的任何和所有使用,包括但不限于(1)用于进一步的产品制造;(2)在提供服务、信息或数据时使用;以及(3)产品的转售,无论该产品是否转售用于研究。研究者无权修改或以其他方式创造产品的变体。未经Promega事先明确的书面同意,不得擅自使用或转让本产品。

对于将Nano-Glo®品牌试剂用于向基因编码的自荧光蛋白以外的受体进行能量转移(如生物发光共振能量转移),研究人员必须:
(i)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对该产品的所有能量转移活性进行测定;或
(ii)联系Promega获得使用该产品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

关于本标签许可以外的任何用途,包括任何诊断、治疗、预防或商业用途,请联系Promega获取供应和许可信息。Promega对产品不作任何明示或默示的陈述或保证,包括关于适销性或适合某一特定用途的陈述或保证。本标签许可的条款应受美国威斯康辛州法律管辖。

专利申请中。

美国帕特。No. 8,809,529,欧洲派特。2635582号及其他专利及未决专利。

美国帕特。第9,797,889号和9,797,890号以及其他未决专利。

规范

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盒子里是什么?

部分# 大小

pF4A CMV flexxi®矢量

C848A 1×20μg

pFC34K LgBiT TK-neo flexxi®Vector

N192A 1×20μg

pFC36K SmBiT TK-neo flexxi®Vector

N193A 1×20μg

pFN33K lgbtk -neo flexxi®Vector

N194A 1×20μg

pFN35K SmBiT TK-neo flexxi®Vector

N195A 1×20μg

NanoBiT®负控制向量

N202A 1×20μg

LgBiT-PRKAR2A控制向量

N203A 1×20μg

SmBiT-PRKACA控制向量

N204A 1×20μg

纳米glo®活细胞基板

N205A 2×125μl

纳米glo®LCS稀释缓冲液

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研究人员无权修改或以其他方式创建NanoBiT®技术亚基的核苷酸序列变体,但研究人员可以在NanoBiT®技术亚基的末端创建融合基因序列。未经Promega事先明确书面同意,不得授权使用本产品或其衍生产品。

此外,研究人员必须:
(1a)使用Nano-Glo®品牌发光检测试剂(LARs)对本产品及其衍生物的所有发光活性进行测定,或
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(2a)使用NanoBRET™品牌的能量受体(例如,bret优化的HaloTag®配体)对本产品及其衍生物的所有能量转移活性进行测定,或
(2b)联系Promega获得使用该产品及其衍生品的许可证,用于对非Promega制造的能量接收器进行能量转移分析。

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对于将Nano-Glo®品牌试剂用于向基因编码的自荧光蛋白以外的受体进行能量转移(如生物发光共振能量转移),研究人员必须:
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专利申请中。

美国帕特。No. 8,809,529,欧洲派特。2635582号及其他专利及未决专利。

美国帕特。第9,797,889号和9,797,890号以及其他未决专利。

规范

你正在查看: N2016 改变配置

盒子里是什么?

部分# 大小

FRB-LgBiT控制向量

N200A 1×20μg

FKBP-SmBiT控制向量

N201A 1×20μg

SDS

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证书的分析

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仅供研究用途。不用于诊断程序。

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本产品不允许转让。研究人员可以在自己的研究中使用本产品,也可以将衍生品转让给他人用于研究用途,前提是在转让时将本标签许可的副本提供给接受者,且接受者同意受本标签许可条款的约束。

研究人员无权修改或以其他方式创建NanoBiT®技术亚基的核苷酸序列变体,但研究人员可以在NanoBiT®技术亚基的末端创建融合基因序列。未经Promega事先明确书面同意,不得授权使用本产品或其衍生产品。

此外,研究人员必须:
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