蛋白质纯化

蛋白质纯化是分析单个蛋白质和蛋白质复合物的基本步骤。大肠杆菌由于易于使用、细胞生长迅速和培养成本低，仍然是许多研究人员生产重组蛋白的首选。在大肠杆菌中表达的蛋白质可以相对大量地纯化，但这些蛋白质，特别是真核蛋白质，可能没有表现出适当的蛋白质活性或折叠。培养的哺乳动物细胞为生产具有适当翻译后修饰的正确折叠和功能的哺乳动物蛋白质提供了另一种选择。

为了简化纯化，亲和纯化标签可以融合到感兴趣的重组蛋白上。常见的融合标记是添加到重组蛋白的N端或c端上的多肽、小蛋白或酶。纯化重组蛋白的第一步是制备细胞裂解液或上清液。对于分泌蛋白，需要最少的上清制备，然后对纯化蛋白进行选择性结合、洗涤和洗脱。纯化后的蛋白质可以用蛋白酶裂解以去除亲和标记。