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ADCC报告生物测定,V变种

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基于moa的生物测定法测定FcγRIIIa (V158)功能

  • 完整套件:你需要开始的所有东西
  • 核心试剂盒:与客户定义的Ab和靶细胞一起使用
  • 目标套件:与核心套件一起使用的控件
  • 也可在细胞传播模型(CPM)格式

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ADCC报告生物测定,V变种
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消除原代细胞ADCC分析的不确定性和可变性

Fc受体介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)是一种重要的作用机制,通过抗体靶向病变细胞进行清除。人FcyRIIIa基因在编码氨基酸残基158的位置出现多态性。这转化为具有较高亲和力的FcyRIIIa变体,其氨基酸158处含有缬氨酸(V158),而具有较低亲和力的FcyRIIIa变体携带苯丙氨酸F158。

用来测量ADCC的经典方法使用原供者外周血单个核细胞(PBMCs)或纯化的自然杀伤细胞(NK),这些细胞表面表达Fc受体。杀死目标细胞是该通路激活的一个终点,并用于经典的ADCC生物测定,依赖献血者外周血单个核细胞(PBMCs)或自然杀伤(NK)细胞亚群作为从献血者分离的效应细胞。

这些以原代细胞为基础的测定反应变量很大,准备过程繁琐,可能导致背景读数过高。ADCC report生物测定法通过消除对原代细胞培养的要求,克服了传统方法的许多局限性。

工作流

培养细胞的标准生物测定工作流程
改进的生物测定工作流程与解冻和使用细胞

标准化试剂改善结果

  • 与传统方法相比,解冻使用电池格式节省了大量的时间和劳动力,同时减少了可变性。
  • 试剂盒包括标准格式的所有所需试剂。
  • 易于适应高吞吐量工作流程。

测定原理

Fc效应报告生物测定使用了传统原代细胞基础测定的另一种读数:Fcγ r和nfat介导的效应细胞中荧光素酶活性的激活。原代细胞被稳定表达人FcγRIIIa V158和nfat诱导的荧光素酶的Jurkat细胞系所取代。

10338 ma-w

发光检测监测Fc效应活性

在与与靶细胞结合的相关抗体的Fc区结合后,表达Fcγ riiia的ADCC生物测定效应细胞将转导细胞内信号,导致nfat介导的荧光素酶活性,这种活性可以很容易地量化。

分析性能数据

准确性和精密度是生物测定和生物制剂发展的关键。ADCC记者生物测定法既准确又精确。准确性是衡量结果与目标或参考值的接近程度。精度是可重复性的衡量标准。

准确性:复制引用或“目标”值的能力的度量。

IntraLab精度:在短时间内,在相同的操作条件下,对同一同质样品进行多次测定的重复性测量(同一分析人员;相同的实验室;当天)。

中间精度:用不同的分析仪或设备或在不同的时间对同一同质样品进行多次测定的重复性的测量。

线性:测定法提供与样品浓度成正比的测量值的能力。

32454752 -数据-目标的总和

产品的格式

完整的包

  • 包括ADCC生物测定效应细胞,靶细胞,对照抗体,细胞培养基和测定试剂。
  • 推荐作为入门套件使用。
  • 可用Raji或WIL2-S靶细胞。

核心工具

  • 包括ADCC生物测定效应细胞,细胞培养基和测定试剂。
  • 建议与客户定义的抗体和靶细胞一起常规使用。
  • 可提供1倍和5倍的尺寸。

目标设备

  • 包括ADCC生物测定靶细胞和对照抗体。
  • 建议与所有Fc效应器生物测定核心套件一起作为对照使用。
  • 可用Raji或WIL2-S靶细胞。
32454665 - adcc -产品-格式

生物测定效应细胞,繁殖模型

  • 包括ADCC生物测定效应细胞(CPM);这些都是冷冻保存的细胞,可以解冻、繁殖并储存起来长期使用。产品包括2 × 10的两个小瓶7细胞/毫升和1.0毫升/瓶。一个小瓶应该解冻,繁殖和细胞冷冻,以创建一个细胞库。剩余的小瓶应保留作为备份。
  • Bio-Glo™荧光素酶检测系统是ADCC生物检测效应细胞增殖模型使用的必需试剂。

控制抗体,Anti-CD20

  • 用于ADCC生物测定作为对照抗体。

有关其他格式选项,请查询。

ADCC报告生物测定精度,准确性和线性

WIL2-S靶细胞

参数 结果
精度 预期相对效价% %的复苏
50 97.7
75 88.5
125 98.4
150 98.4
重复性(%的简历) 100%(参考) 5.0%
中级精度(% CV) 7.3%
线性(右2 0.995(50 - 200%范围)
线性(y = mx + b) Y = 1.016x - 0.052

Raji靶细胞

参数 结果
精度 预期相对效价% %的复苏
50 101.0
75 101.2
150 93.8
200 96.7
重复性(%的简历) 100%(参考) 9.1
中级精度(% CV) 3.0
线性(右2 0.997(50 - 200%范围)
线性(y = mx + b) Y = 0.922x + 5

规范

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盒子里是什么?

部分# 大小 浓度

ADCC生物测定效应细胞

G701A 1 × 1瓶

ADCC生物测定靶细胞(Raji)

G870A 1×.55ml

低血清免疫球蛋白

G711A 1×4毫升

控制Ab, Anti-CD20

GA113A 1×5μg 0.5毫克/毫升

RPMI 1640中

G708A 1×36毫升

Bio-Glo™荧光素酶分析缓冲液

G719A 1×10毫升

Bio-Glo™荧光素酶检测底物

G720A 1 × 1瓶

SDS

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证书的分析

按地段编号查册

使用限制

仅供研究用途。不用于诊断程序。

储存条件

详细的存储说明请参见协议。

专利和免责声明

不用于医疗诊断仅供体外使用。在使用本产品时,接收方同意受本有限使用声明条款的约束。如果接收方不愿意接受此有限使用声明的条件,且产品未使用,Promega将接受未使用产品的退货,并向接收方提供全额退款。
本产品不得由接受方进一步销售或转让,且只能由接受方使用,且只能用于(1)研究使用,(2)生物药物的药物发现和开发,(3)生物药物的质量保证检测,(4)生物药物的产品释放试验。不得作其他商业用途。“商业使用”指接收方为金钱或其他代价对本产品的任何和所有使用,包括向无关联的第三方提供服务、信息或数据,以及为任何用途转售本产品。受体无权对效应细胞或在效应细胞内稳定转染的荧光素酶基因进行繁殖、修改、衍生、基因工程或以其他方式创建变体。此外,接收方必须使用从Promega公司购买的Bio-Glo™荧光素酶测定系统进行本产品的所有发光活性测定,或与Promega公司联系,以获得本产品与Promega公司以外的试剂使用的许可证。Promega不就本产品的适销性或适合某一特定用途作出任何明示或暗示的陈述或保证。本协议条款受美国威斯康辛州法律管辖。

不用于医疗诊断仅供体外使用。在使用本产品时,接收方同意受本有限使用声明条款的约束。如果接收方不愿意接受此有限使用声明的条件,且产品未使用,Promega将接受未使用产品的退货,并向接收方提供全额退款。
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专利申请中。

美国帕特。8008006号。

美国帕特。第10,077,244号等专利。

由Lonza Cologne GmbH根据美国Pat授权。编号7,700,357,8,192,990和8,003,389,欧洲派。no . 1297119、1522587、1607484和1741778等未决和已发布的专利。

规范

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盒子里是什么?

部分# 大小 浓度

ADCC生物测定效应细胞

G701A 1 × 1瓶

生物测定靶细胞(WIL2-S)

G727A 1×.55ml

低血清免疫球蛋白

G711A 1×4毫升

控制Ab, Anti-CD20

GA113A 1×5μg 0.5毫克/毫升

RPMI 1640中

G708A 1×36毫升

Bio-Glo™荧光素酶分析缓冲液

G719A 1×10毫升

Bio-Glo™荧光素酶检测底物

G720A 1 × 1瓶

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专利申请中。

美国帕特。8008006号。

美国帕特。第10,077,244号等专利。

由Lonza Cologne GmbH根据美国Pat授权。编号7,700,357,8,192,990和8,003,389,欧洲派。no . 1297119、1522587、1607484和1741778等未决和已发布的专利。

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ADCC生物测定效应细胞

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美国帕特。第10,077,244号等专利。

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ADCC生物测定靶细胞(Raji)

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美国帕特。第10,077,244号等专利。

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ADCC生物测定效应细胞

G701A 5 × 1瓶

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G711A 5×4毫升

RPMI 1640中

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专利申请中。

美国帕特。8008006号。

美国帕特。第10,077,244号等专利。

由Lonza Cologne GmbH根据美国Pat授权。编号7,700,357,8,192,990和8,003,389,欧洲派。no . 1297119、1522587、1607484和1741778等未决和已发布的专利。

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生物测定效应细胞(CPM)

G701B 2×1.0毫升

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XX

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美国帕特。8008006号。

由Lonza Cologne GmbH根据美国Pat授权。编号7,700,357,8,192,990和8,003,389,欧洲派。no . 1297119、1522587、1607484和1741778等未决和已发布的专利。

规范

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部分# 大小 浓度

控制Ab, Anti-CD20

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BB

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