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测序:NGS和Sanger测序

在下一代测序工作流程中,核酸从样本中提取并碎片化,排列到特定平台的文库结构中,扩增leyu体育靠谱吗和测序。无论使用哪种示例类型或平台,此工作流程中的每个步骤都对成功的结果至关重要。

Promega支leyu乐鱼网持NGS工作流程的产品包括ProNex®NGS定量和尺寸选择DNA纯化系统,用于测序前的文库制备,以及核酸提取和定量系统。leyu体育靠谱吗Spectrum Compact毛细管电泳系统和ProDye™终结者测序系统支持Sanger测序应用,例如验证NGS碱基调用和确认转化培养物中的基因组编辑。

NGS和Sanger测序介绍

从基础科学到转化研究,下一代测序(NGS,也被称为大规模并行测序)开辟了基因组学、肿瘤学和生态学的新途径。NGS技术的可用性使测序成为诊断、法医和流行病学调查的常规和可行的选择,并使许多基因组分析应用取得进展。

在Sanger测序(第一代测序)中,DNA片段通过加入链末端核苷酸进行测序,然后通过电泳分离并通过荧光信号检测。在NGS中,数百万个DNA片段被平行测序,当核苷酸被添加到DNA链中时被检测到。在DNA提取和碎片化后,每个DNA模板的簇被PCR扩增,并附着在固体表面上。然后用核苷酸对它们进行询问,并在DNA测序时进行成像/测量。

有几种可用的NGS技术:Illumina测序仪使用可逆终止端染料标记的核苷酸来审问捕获的DNA。读取每个碱基后,通过裂解和洗涤去除终止子和染料,生成正常的核苷酸。该链再次被扩展,并重复该过程以继续沿着该链测序。而不是使用染料标记的核苷酸,离子激流测序仪测量氢离子的释放碱掺入,和454系统测量发光的核苷酸掺入。这些测序仪可以并行处理大量样本,提高了速度和吞吐量,并使全基因组测序在短时间内既可实现又负担得起。