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测序:NGS和Sanger测序

在下一代测序工作流程中,从样本中提取核酸并碎片化,排列成平台特异性文库结构,扩增和leyu体育靠谱吗测序。无论所使用的示例类型或平台是什么,此工作流中的每一步都对成功的结果至关重要。

Promega支leyu乐鱼网持NGS工作流程的产品包括ProNex®NGS定量和尺寸选择性DNA纯化系统,用于测序前的文库准备,以及核酸提取和定量系统。leyu体育靠谱吗Spectrum Compact毛细管电泳系统和ProDye™终结者测序系统支持Sanger测序应用,如验证NGS碱基调用和确认转化培养物中的基因组编辑。

NGS和Sanger测序介绍

从基础科学到转化研究,下一代测序(NGS,也被称为大规模并行测序)为基因组学、肿瘤学和生态学的研究开辟了新的途径。NGS技术的可用性使测序成为诊断、法医和流行病学调查的常规和可行的选择,并使许多基因组分析应用取得进展。

在桑格测序(第一代测序)中,DNA片段通过加入链端核苷酸进行测序,然后用电泳分离并用荧光信号检测。在NGS中,数以百万计的DNA片段被并行排序,核苷酸被添加到DNA链上时被检测到。在DNA提取和破碎后,每个DNA模板的簇被PCR扩增,并附着在固体表面。然后用核苷酸对它们进行检测,并在DNA测序时进行成像/测量。

目前有几种可用的NGS技术:Illumina测序仪使用可逆终止剂染料标记核苷酸来检测捕获的DNA。一旦每个碱基被读取,终止子和染料通过裂解和洗涤被去除,产生一个正常的核苷酸。dna链再次可扩展,重复这一过程,沿着dna链继续测序。而不是使用染料标记的核苷酸,离子激流测序仪测量氢离子的释放在碱合并,和454系统测量发光在核苷酸合并。这些测序仪可以并行处理大量的样本,提高了速度和吞吐量,并在短时间内实现和负担得起整个基因组的测序。