选择荧光素酶报告试验
记者化验比较指南。
本指南将帮助您了解报告分析，并找到最适合您需要的报告分析。访问Promega目录列表，查看本文介绍的Reporter Assays的订购信息。
报告基因和检测化学
当创建荧光素酶报告试验时，有两个重要的因素需要考虑:荧光素酶报告蛋白本身和用于检测报告活性的检测化学方法。这两种成分的特性共同决定了检测的总体性能。通过选择最适合您的实验目标的报告/检测方案，您可以定制您的荧光素酶报告分析，为您的研究创建最佳的解决方案。
Promega提供3种不同的荧光素酶报告器:NanoLuc®荧光素酶(Nluc,19kDa)，Renilla萤光素酶(Rluc, 36kDa)和萤光素酶(Fluc, 61kDa)的大小、亮度和蛋白质半衰期不同。
| 荧光素酶记者 | 报告基因名称 |
|---|---|
| 萤火虫荧光素酶 |
luc, luc+， luc2, luc2P, luc2CP
Luc / Luc +:原荧光素酶基因用于较老的荧光素酶报告系统。 Luc2:密码子优化版的荧光素酶，被设计用于去除大多数隐性转录因子结合位点，并提高哺乳动物的表达。 Luc2P和Luc2CP:包含PEST蛋白降解序列的Luc2的不稳定版本，用于快速反应。 |
| Renilla荧光素酶 |
Rluc, hRluc, hRlucP, hRlucCP
Rluc: Renilla萤光素酶。 hRluc:合成密码子优化Renilla萤光素酶，工程去除隐式转录因子结合位点，以改善哺乳动物的表达。 hRlucP和hRlucCP: hRluc的不稳定版本，包含快速反应的PEST蛋白降解序列。 |
| NanoLuc荧光素酶 |
Nluc, NlucP, secNluc
NlucNanoLuc荧光素酶。 NlucP: NanoLuc荧光素酶具有快速反应的PEST蛋白降解序列。 secNluc:分泌NanoLuc荧光素酶。 |
检测试剂注意事项
每个报告者也可使用多种检测试剂。选择最佳检测试剂的主要考虑因素包括:
- 分析所需的信号强度和整体动态范围。
- 信号稳定性，或半衰期，这将影响您的处理工作流程。
- 所需的处理步骤。非均质分析需要在试剂添加之前单独的裂解液生成步骤。均质检测试剂直接添加到培养细胞中，消除了样品预处理。
- 裂解或活细胞报告检测
- 单或双报告器检测
荧光素酶信号强度和稳定性
双荧光素酶®检测选项
萤光素酶检测选项
在这里，我们比较了转染TK-Rluc (Renilla):TK-Fluc (firefly):载体DNA或TK-Nluc (NanoLuc):TK-Fluc:载体DNA 1:1:8比例的HEK293细胞的发光信号，并按照指示使用NanoDLR™、DLR™或Dual-Glo®荧光素酶检测系统进行检测。NanoDLR(TM)和Dual-Glo(R)试剂是具有较高信号稳定性的均质检测系统。DLR(TM)试剂是一种具有快速衰减的闪光信号的非均质分析方法。
在这里，我们演示了用不同的萤火虫荧光素酶检测试剂测定QuantiLum®重组荧光素酶稀释后随时间的发光信号。荧光素酶检测系统是一种非均质试剂，提供最亮的初始发光与闪光动力学，具有快速信号衰减。Bright-Glo™，ONE-Glo™，ONE-Glo™EX和Steady-Glo®系统均为均质试剂，其初始亮度随信号半衰期的增加而逐渐降低。
荧光素酶信号强度和稳定性
双荧光素酶®检测选项
在这里，我们比较了转染TK-Rluc (Renilla):TK-Fluc (firefly):载体DNA或TK-Nluc (NanoLuc):TK-Fluc:载体DNA 1:1:8比例的HEK293细胞的发光信号，并按照指示使用NanoDLR™、DLR™或Dual-Glo®荧光素酶检测系统进行检测。NanoDLR(TM)和Dual-Glo(R)试剂是具有较高信号稳定性的均质检测系统。DLR(TM)试剂是一种具有快速衰减的闪光信号的非均质分析方法。
萤光素酶检测选项
在这里，我们演示了用不同的萤火虫荧光素酶检测试剂测定QuantiLum®重组荧光素酶稀释后随时间的发光信号。荧光素酶检测系统是一种非均质试剂，提供最亮的初始发光与闪光动力学，具有快速信号衰减。Bright-Glo™，ONE-Glo™，ONE-Glo™EX和Steady-Glo®系统均为均质试剂，其初始亮度随信号半衰期的增加而逐渐降低。
比较荧光素酶测定特性
按荧光素酶或化验类型搜索以比较选项
| 荧光素酶检测 | 分析试剂 | 理想的 | 信号半衰期 | 灵敏度 | 步骤数 | 活细胞试验? | 需要注射器? |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| NanoLuc,萤火虫 | Nano-Glo®双荧光素酶报告检测系统(nanolr) | 均匀Fluc/Nluc双报告器检测，具有选择主报告器的灵活性。当需要稳定信号时，为两个报告器提供最高灵敏度，当Nluc用作主报告器时，提供最高灵敏度选项。理想的低至高通量处理，当需要2个主要报告或内部控制。 | 各2小时 | + + + + + (Nluc) + +(美国人) |
2 (溶菌产物可选) |
没有 | 可选 |
| 萤火虫, Renilla |
双荧光素酶报告检测系统(DLR) | 非均匀Fluc/Rluc双报告器检测。需要裂解液的生成和2个注射器的输送。理想的小样本数量，当最大的通量灵敏度和内部控制需要。 | 10分钟，2分钟 | + + + +(美国人) + + + + (Rluc) |
3. | 没有 | 是的 2喷油器 |
| 萤火虫, Renilla |
Dual-Glo®荧光素酶检测系统 | 均匀Fluc/Rluc双报告器检测，灵敏度降低，信号稳定。当使用Rluc作为内部控制时，非常适合Fluc报告器的高通量处理。 | 各2小时 | + (美国/ Rluc) |
2 | 没有 | 没有 |
| NanoLuc | 纳米glo®荧光素酶检测系统 | 均质Nluc检测，信号明亮稳定。理想的低到高通量处理时，需要最大的灵敏度。 | 2小时 | +++++ | 1 | 不能，除非与secNluc一起使用 | 没有 |
| NanoLuc | 纳米glo®活细胞检测系统 | 用最亮的信号检测活细胞Nluc。理想的单时间点分析，当需要高灵敏度的非裂解分析。 | 30分钟 | ++++ | 1 | 是的 | 没有 |
| NanoLuc | Nano-Glo®Vivazine™活细胞基板 | 活细胞Nluc检测具有中间信号和稳定性。适合持续数小时的动力学分析。 | 12个小时 | +++ | 1 | 是的 | 没有 |
| NanoLuc | 纳米glo®Endurazine™活细胞基质 | 活细胞Nluc检测，信号最稳定。理想的多日动力学分析。 | 最长72小时 | ++ | 1 | 是的 | 没有 |
| 萤火虫 | 荧光素酶检测系统 | 非均匀的流体检测需要裂解液的产生和注射器的输送。理想的小样本数时，需要最大的通量灵敏度。 | 10分钟 | ++++ | 2 | 没有 | 是的 |
| 萤火虫 | Bright-Glo®荧光素酶检测系统 | 均匀Fluc检测提供最亮的信号和最短的半衰期。对于需要高灵敏度的高通量处理非常理想。 | 30分钟 | +++ | 1 | 没有 | 没有 |
| 萤火虫 | ONE-Glo™荧光素酶检测系统 | 具有中等信号和半衰期的均匀磁通检测。理想的高或超高通量处理。 | 45分钟 | ++ | 1 | 没有 | 没有 |
| 萤火虫 | ONE-Glo™Ex荧光素酶检测系统 | 均匀磁通检测具有适度的信号和半衰期和改进的存储稳定性。理想的高或超高通量处理和重复使用。也用于检测NanoDLR中的Fluc，允许单次和双次测定之间使用一致。 | 2小时 | ++ | 1 | 没有 | 没有 |
| 萤火虫 | Steady-Glo®荧光素酶检测系统 | 具有最大信号稳定性和减少信号的均匀Fluc检测。理想的高通量应用时，扩展发光的要求。 | 5个小时 | + | 1 | 没有 | 没有 |
| Renilla | Renilla荧光素酶检测系统 | 非均质Rluc检测需要裂解液生成和注入器输送。理想的小样本数时，需要最大的Rluc敏感性。 | 2分钟 | ++++ | 2 | 没有 | 是的 |
| Renilla | Renilla-Glo荧光素酶检测系统 | 增加信号稳定性的均匀Rluc检测。非常适合高通量处理。 | 40 +分钟 | ++ | 1 | 没有 | 没有 |
| Renilla | ViviRen™活细胞基质 | 活细胞Rluc检测，最高信号。理想的单时间点或短的非裂解分析时，最高的灵敏度要求。 | 10分钟 | +++ | 1 | 是的 | 没有 |
| Renilla | endenren™活细胞基质 | 活细胞Rluc检测具有最大的稳定性。适用于扩展动力学分析。 | 长达24小时 | + | 1 | 是的 | 没有 |
