研究蛋白质与BRET和NanoLuc®荧光素酶的相互作用

蛋白质:蛋白质相互作用在广泛的细胞过程中起着重要作用。研究蛋白质之间相互作用的传统方法，如共免疫沉淀，不能提供细胞环境的数据。利用生物发光共振能量转移(BRET)，可以定量测量活细胞中蛋白质之间的相互作用。在某些情况下，甚至可以实时测量这些相互作用，不仅可以观察相互作用的形成，还可以观察伴侣的分离。

BRET使用融合到感兴趣蛋白质上的生物发光供体和融合到其结合伙伴上的荧光受体来测量蛋白质之间的相互作用。生物发光供体，通常是荧光素酶，不使用光激发荧光团，而是通过偶极-偶极耦合传递共振能量。为了传递共振能量，供体必须在受体10纳米范围内，并处于正确的方向，这使得该技术在近距离测量蛋白质时非常有用。

NanoLuc®荧光素酶体积小，发射明亮，这两者都是BRET研究中生物发光供体的优良品质。NanoLuc®荧光素酶的质量为19kDa，大大小于Renilla(36kDa)或萤火虫(61kDa)荧光素酶。在研究蛋白质相互作用时，较小的供体减少了空间效应的问题。NanoLuc®荧光素酶也比其他荧光素酶亮约150倍，允许融合蛋白在低水平表达的同时仍然提供足够的能量进行转移。强信号还允许使用比弱信号荧光素酶更红移的荧光团。使用红移荧光团减少了供体和受体发射光谱的重叠，提供了更好的信噪比。

选择合适的供体、受体和底物组合对成功的BRET检测非常重要。NanoLuc®萤光素酶，用NanoBRET™618荧光团标记的HaloTag®蛋白和呋喃咪嗪底物的组合创建了优化的NanoBRET™分析，与传统的BRET分析相比，具有最佳的光谱重叠，增强的信号和更低的背景。