蛋白质定位，成像，转运和周转
无论您想在细胞表面或细胞内部标记蛋白质，特定的，不可逆的荧光HaloTag®配体可以帮助您定位和跟踪您感兴趣的蛋白质的运动。
确定你感兴趣的蛋白质的细胞内位置
想要标记细胞内蛋白质?选择荧光HaloTag®配体可以进入细胞中找到感兴趣的HaloTag®融合蛋白。在生理条件下，HaloTag®蛋白与HaloTag®配体形成稳定的共价键，具有较高的标记特异性和稳定的复合物。在标记一次后跟随蛋白质的细胞命运，或者在一段时间后使用脉冲追踪选项标记第二次荧光标记。脉冲追踪标记可以显示蛋白质随时间的运输或周转。
HaloTag®融合蛋白的荧光标记
使用融合了HaloTag®蛋白和荧光HaloTag®配体的蛋白质对细胞进行成像。你可以成像细胞或不冲洗，以确定亚细胞的位置。
使用荧光HaloTag®配体的细胞成像
HaloTag®配体标记活细胞，然后固定。稳定转染HaloTag®基因的HEK293细胞融合到核定位序列的三个副本，与未转染的HaloTag®TMR标记的HEK293对照(板一个)， HaloTag®diAcFAM (面板BHaloTag®香豆素(面板C)或HaloTag®Oregon Green®配体(面板D)．
膜蛋白定位研究
通过标记你感兴趣的膜蛋白与HaloTag®蛋白融合，并使用一种不能进入细胞的荧光配体，检查受体转运。HaloTag®报告蛋白和配体之间的共价键意味着即使在固定细胞所需的变性条件下，您也可以确定您的蛋白质是否仍然存在于膜中，或者是否发生了翻转或内化。这些细胞impermeantHaloTag®配体与HaloTag®蛋白共价结合，这意味着您可以在严格的条件下分析蛋白质。
细胞表面HaloTag®融合蛋白的活细胞标记。图A和B显示HEK293细胞稳定表达HaloTag®-ECS(细胞外表面;由信号序列和b1-整合素融合蛋白的单跨膜结构域组成，并用HaloTag®Alexa Fluor®488配体标记，然后成像。C和D显示表达Alexa Fluor®660配体标记的HaloTag®-EDG1 (GPCR受体)融合的U2OS细胞，然后成像。共聚焦图像显示荧光(面板A和C)局限于细胞表面，在DIC/荧光覆盖面板上也可以清楚地看到(B和D组)．图像是在奥林巴斯FV500共聚焦显微镜上使用适当的滤波器组生成的。
多路利用免疫细胞化学
使用Anti-HaloTag®多克隆抗体使HaloTag®融合蛋白与荧光配体进行协同标记成为可能。确认你的蛋白质在体内被HaloTag®配体特异性标记，特别是当二抗使用光谱清晰的荧光团进行免疫细胞化学(ICC)时。HaloTag®配体可以与活细胞一起使用，然后使用Anti-HaloTag®pAb将细胞固定用于ICC。ICC标记专门针对HaloTag®蛋白，减少了背景染色。
HaloTag®-p65融合蛋白与HaloTag®TMR配体和Anti-HaloTag®pAb的协作。用5µM HaloTag®TMR配体标记细胞15分钟，轻轻洗涤，然后用2µg/ml AlexaFluor®488偶联抗兔IgG (Invitrogen)孵育。最后，用DAPI (Vector Laboratories)反染色。图像收集在奥林巴斯IX81外显荧光显微镜上，带有适合罗丹明和AlexaFluor®488的滤镜组。面板。HaloTag®TMR配体对HEK293-p65-HT2细胞的细胞质(红色)标记。面板B。Anti-HaloTag®pAb细胞质(绿色)标记。面板C。配体和抗体结合活性的共定位。面板D。红色和绿色荧光合并，DAPI反染细胞核(蓝色)。箭头表示很少或不表达HaloTag®-p65的罕见细胞。
