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实时蛋白质:蛋白质相互作用

蛋白质之间的相互作用调节了大量的生物过程——从信号转导过程中的短暂相互作用到大型多蛋白复合物的组装。NanoLuc的超高亮度和小尺寸®荧光素酶使标记蛋白质成为可能,从而降低干扰自然功能的风险,检测在原生条件下活细胞中的蛋白质相互作用。

基于互补的纳米比特检测蛋白质相互作用®记者

实时测量蛋白质相互作用

NanoLuc®二进制技术(NanoBiT)是一种基于NanoLuc的双亚基系统®可应用于细胞内蛋白质检测的荧光素酶:活细胞中的蛋白质相互作用(PPIs)。的NanoBiT®PPI系统由两个小的子单元组成,大比特(LgBiT;18kDa)和Small BiT (SmBiT;1.3kDA),表达为目标蛋白的融合。LgBiT和SmBiT子单元已经独立优化了稳定性和最小的自关联。靶蛋白的相互作用促进亚基互补,从而产生明亮的发光酶。

我们提供Nano-Glo®活细胞检测系统短期而且扩展实时测量蛋白质相互作用动态。

开始使用NanoBiT®

将纳米比特技术应用于生化分析格式

观看弗朗西斯克里克研究所的研究人员如何与Promega合作,将NanoBiT技术应用于高通量、无细胞的生化格式。

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创建稳定的纳米比特®细胞系

虽然融合伙伴的短暂表达可以满足许多蛋白质相互作用实验,稳定的细胞系往往需要最大的重现性。这张海报描述了用bit - ready载体创建稳定的细胞系。这种方法允许SmBiT和LgBiT融合蛋白在质粒DNA随机整合到基因组后,从同一位点以相似水平转录。

双向矢量顺序

使用基于bret的NanoBRET™分析方法测量蛋白质相互作用

低背景和增强信号的BRET检测

带有BRET的PPIs的研究依赖于能量从连接到相互作用蛋白质伙伴的荧光素酶(BRET供体)转移到标记到另一个相互作用蛋白质伙伴的荧光BRET受体。能量的转移被两个合作伙伴的邻近性所缓和。NanoBRET™检测是一种使用NanoLuc的大幅度改进的BRET检测方法®荧光素酶作为能量供体和HaloTag®用NanoBRET™618荧光团标记的蛋白质作为能量受体。NanoLuc发出的明亮的蓝移信号®供体与远红移光环标签结合®与传统的BRET分析相比,受体创建了具有最佳光谱重叠、增加信号和较低背景的蛋白质相互作用分析。

设计您自己的分析方法,或从大量预先构建的NanoBRET™PPI分析方法中选择,以溴域蛋白和其他表观遗传蛋白、转录蛋白、信号蛋白和激酶分析以及膜蛋白分析为目标。

开始使用NanoBRET™

使用NanoBRET™技术检测craft - braf相互作用

CRAF和BRAF蛋白激酶在Ras-Raf-MAPK信号通路中发挥作用,在肿瘤发生和癌症发生中发挥重要作用。本文描述了一种利用NanoBRET™技术监测craft - braf异质二聚的蛋白质:蛋白质相互作用分析的发展。

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基于bret分析的蛋白质相互作用