总结
使用CRISPR-Cas9技术，几乎可以在任何感兴趣的基因组位置创建双链断裂(dsb)。在DSB之后，细胞修复机制可以进行非同源端连接(NHEJ)创建敲除，或者，如果提供了供体DNA模板，细胞可以进行同源定向修复(HDR)以敲入精确的修改或插入。通常，研究人员可能希望敲入一个标签序列，以便在内源性调控条件下进一步研究蛋白质生物学。与标记蛋白的异位表达相比，内源性位点表达将消除过度表达的伪效应、错误定位和异常信号，从而更好地理解天然蛋白质生物学。然而，许多现有的蛋白质标签很大，使得crispr介导的敲入过程效率低下。此外，基于抗体的检测方法和低灵敏度使得许多蛋白质标记不适合用作内源性标记。最近，开发了HiBiT生物荧光蛋白标记系统，由于其11个氨基酸的标记尺寸小，灵敏度高，无抗体检测方法简单，提供了一种适合crispr介导的基因标记的标记选项。在本次网络研讨会中，我们将向您介绍一种简单有效的crispr介导的HiBiT标记方法，无需分子克隆步骤，在短短24小时内将您从基因编辑带到内源性生物学分析。
演讲者
玛丽·施文博士
高级研究科学家
Schwinn博士是Promega Advanced Technologies Group的细胞生物学团队成员，在那里她帮助开发了基于荧光素酶的技术，用于研究细胞内蛋白质相互作用、丰度和翻译后修饰。最近，她专注于将这些技术与CRISPR/Cas9结合起来，在内源性水平上研究蛋白质动力学。在加入Promega之前，Schwinn博士在Hector F. DeLuca博士的实验室获得了威斯康星大学麦迪逊分校的生物化学博士学位，并在病理学和实验室医学系接受了Donna M. Peters博士的博士后培训。