改进的化学NGS库清理和大小选择

下一代测序(NGS)文库需要不同数量、浓度和大小的高质量核酸输入，这取决于文库的制备方法和使用的测序平台。leyu体育靠谱吗不管这些变化，在大多数情况下，基于磁珠的化学被用作整个方案的一部分。使用磁珠化学的步骤分为两类基本功能:

1. 样品清理:去除测序适配器或PCR引物，dNTP，酶或不需要的缓冲配方
2. 大小选择:去除不需要的核酸片段或文库分子，这些片段或文库分子高于或leyu体育靠谱吗低于下游测序平台的最佳指定大小范围

通过改变珠子化学物质与溶液中DNA原始体积的比例，用户可以改变珠子捕获或留在溶液中的DNA的大小。传统上，上述两种功能都涉及使用具有羧基化聚合物涂层表面的磁珠，结合含有拥挤剂(PEG)和盐的缓冲液。虽然商业上可用的产品和自制方法被广泛用于NGS库准备方法，leyu乐鱼网但这些协议的总体性能有几个方面需要改进。这些包括:

• 每次洗涤或尺寸选择步骤，DNA的显著损失高达50%
• 回收率和尺寸选择的样品间重复性差
• 化学物质粘度高，导致难以精确移液和自动化
• 保留高分子量以上的用户所需尺寸范围

为了提高NGS库制备的整体性能，我们为新的化学解决方案设定了以下目标:

• DNA回收率提高，平均>80%+在每个洗涤或尺寸选择步骤后，保留高于目标截止尺寸的DNA
• 降低化学粘度，提供更准确的移液和更好的再现性
• 更精确的尺寸截断，更少的高分子量DNA保留在所需的范围之外

我们将讨论一种新的尺寸选择化学在产量、选择性、可用性和功能性方面的各种改进，包括PCR纯化、增强的循环无细胞DNA纯化、NGS文库尺寸选择和测序结果。